Imunofenotypizácia hemoblastóz

Významný pokrok v hematologických štúdií združených v posledných rokoch s využitím moderných imunologických metód a automatizované nástroje pre analýzu a triedenie buniek periférnej krvi a kostnej drene - cytometrom prietoku. Tradičné morfologické a Cytochemické štúdie ochorení substrátu buniek (krv, červené kostnej drene, lymfatických uzlín, sleziny, atď.), V mnohých prípadoch, najmä v lymfoproliferatívne ochorenie, neukazujú celý rad možností medzi morfologicky podobných formách a identifikovať pôvod patologického klonu , Tieto problémy je možné vyriešiť iba štúdiom imunologických charakteristík buniek. Každý stupeň diferenciácie krvotvorných buniek má svoj vlastný súbor antigénov, ktoré sú na medzinárodnej klasifikácie známe ako diferenciácia a diferenciácia sú rozdelené do zhlukov, určeného CD.

V bloku diferenciáciu neoplastických zmien môže nastať v akejkoľvek fáze normálneho vývoja buniek, čo má za následok bunkového klonu patologického definovanie ochorení substrátu a majúce charakteristiku rovnaký imunologický (alebo fenotypovej). Po štúdium týchto markerov v bunkách môže byť určená akoukoľvek formou alebo prevedením ochorenia sú zhodné, tj. Na základe imunologickej fenotypu bunky diferenciálnu diagnostiku, ktoré je najzložitejšia v lymfoproliferatívnych porúch, pretože hlavné bunkový substrát patologických ochorení sú takmer rovnaký typ buniek morfologicky.

Fenotypizácia umožňuje použitie monoklonálne protilátky typické blastickej bunky a zrelé myeloidnej krv, mono-, lymfocytárnej série v prítomnosti diferenciačných antigénov (receptory) v bunkovej stene. V časti "Vyhodnotenie imunitného stavu organizmu" sú čiastočne opísané charakteristiky a diagnostický význam markerov buniek. Nižšie je uvedený stručný opis markerov antigénnych buniek, ktoré sa aplikujú na diagnostiku hemoblastózy. Na membránach krviniek a červenej kostnej drene je možné identifikovať nasledujúce antigény (markery).

• CD2 je monomérny transmembránový glykoproteín. Je prítomný na povrchu všetkých cirkulujúcich T-lymfocytov a niektorých NK-lymfocytov. CD2 sa zúčastňuje procesu alternatívnej aktivácie T-lymfocytov. Detekcia CD2 pomocou monoklonálnych protilátok v klinickej praxi sa používa na fenotypovanie akútnych T-bunkových leukémií, lymfómov, chronických zápalových a imunodeficientných stavov.
• CD3 - proteínový komplex spojený s antigén-špecifickým T-bunkovým receptorom, je hlavným funkčným markerom T-lymfocytov. Umožňuje prenos aktivačného signálu z membrány do cytoplazmy bunky. Detekcia CD3 je indikovaná na diagnostiku akútnej leukémie T-buniek, lymfómu (CD3 nie je exprimovaný v lymfoidných nádoroch iných než T-buniek) a imunodeficitných ochorení.
• CD4 - transmembránový glykoproteín exprimovaný podmnožinu T-pomocných (indukčné cievky), ktorá tvorí 45% lymfocytov periférnej krvi. V počiatočných štádiách vývoja lymfocytov v týmuse sú CD4 antigény, rovnako ako CD8, exprimované všetkými kortikálnymi lymfocytmi. Medulárnou tymocytov, ktorý je podobný fenotyp zrelých CD4 + periférnej krvi T-buniek (T-helper bunky), a to buď už exprimujú CD4 alebo CD8 receptory. V periférnej krvi sa až 5% buniek súčasne označuje CD4 a CD8. Mierna expresia CD4 je možná na niektorých bunkách monocytov. CD4 je exprimovaný vo väčšine prípadov, T-bunkového lymfómu, vrátane mycosis fungoides, a HTLV-spojená T buniek leukémie (HTLV - ľudský T-lymfotropický vírus - ľudský T-lymfotrópny virus).
• CD5 - jednoreťazcový glykoproteín, prítomný na všetkých zrelých T-lymfocytoch a väčšine tymocytov, je slabo exprimovaný B-lymfocytmi. CD5 sa deteguje na neoplastických bunkách chronickej lymfocytovej leukémie a centrocytického lymfómu B-buniek. U iných typov malígnych lymfoidných ochorení - folikulárny lymfóm, leukémia vlasových buniek, veľký bunkový lymfóm - CD5 nie je exprimovaný.
• CD7 je jednovláknový proteín, najskorší marker diferenciácie T-buniek. Je exprimovaný pro-T-lymfocytmi ešte predtým, ako migrujú do týmusu. CD7 sa deteguje na väčšine buniek NK, na monocytoch je zaznamenaná slabá expresia. B-lymfocyty a granulocyty neobsahujú tento antigén. Definícia CD7 sa používa na diagnostiku lymfómov, detskej lymfoblastickej leukémie T-buniek.
• CD8 je proteín pozostávajúci z dvoch polypeptidových reťazcov spojených disulfidovými mostíkmi. Je vyjadrená subpopuláciou cytotoxických a supresorových T lymfocytov, ktoré obsahujú 20 až 35% lymfocytov periférnej krvi. Tento antigén má tiež NK lymfocyty, kortikálne tymocyty, 30% medulárnych tymocytov a subpopuláciu buniek červenej kostnej drene. CD8 sa skúma na kvantitatívne vyhodnotenie obsahu T-supresora (pozri časť "Supresory T-lymfocytov v krvi" vyššie).

• CD10 je endopeptidáza asociovaná s bunkovou membránou. CD10 exprimuje mladé formy B lymfocytov a subpopuláciu kortikálnych lymfocytov. CD10 exprimuje všetky bunky ALL.
• CD11c exprimujú na bunkovej membráne makrofágy, monocyty, granulocyty, NK bunky a bunky leukémie vlasových buniek.
• CD13 - glykoproteín exprimovaný bunkami myelomonocytické radu (progenitorové bunky, neutrofily, bazofily, eozinofily, monocyty a bunky myeloidnej leukémie). Chýba v T a B lymfocytoch, erytrocytoch a krvných doštičkách.
• CD14 je glykoproteín povrchovej membrány. Vyjadruje sa hlavne monocyty a makrofágy. CD14 sa deteguje vo viac ako 95% monocytoch periférnej krvi a kostnej drene. Pri akútnej myeloblastickej leukémii je pozorovaná silná expresia CD14. Pri akútnej a chronickej lymfoblastickej leukémii tento antigén nie je exprimovaný.
• CD15 je oligosacharid. Zúčastňuje sa procesov fagocytózy a chemotaxie. Tento antigén je prítomný na povrchu zrelých granulocytov a Berezovských-Sternbergových buniek. Expresia CD15 antigénu je detekovaná pri Hodgkinovej chorobe. U non-Hodgkinových lymfómov CD15 nie je vo väčšine prípadov detegovaný.
• CD16 sa exprimuje na povrchu granulocytov, monocytov, makrofágov a NK buniek. Všetky lymfocyty exprimujúce tento antigén majú schopnosť bunkovej cytotoxicity závislej od protilátky. CD16 sa určuje pri typizácii chronických myelocytárnych leukémií na charakterizáciu NK buniek.
• CD19 je glykoproteín prítomný na všetkých periférnych B lymfocytoch, ako aj na všetkých prekurzoroch B buniek. Chýba na plazmatických bunkách. Toto je najstarší marker B-buniek, hrá dôležitú úlohu pri regulácii aktivácie a proliferácie B-lymfocytov. CD19 sa exprimuje na všetkých neoplastických bunkách akútnej leukémie B-bunkového pôvodu a je prítomný aj v niektorých formách akútnej monoblastovej leukémie.
• CD20 je neglykozylovaný proteín. Pri ontogenéze B-lymfocytov sa antigén CD20 objavil po CD19 v štádiu diferenciácie lymfocytov pred B bunkami. Chýba na plazmatických membránach plazmatických buniek. Vyjadruje sa v ALL, B-bunková chronická lymfocytová leukémia, leukémia vlasatých buniek, Burkittov lymfóm a veľmi zriedkavo v akútnej monoblastovej leukémii.
• CD21 je glykoproteín, vo významnom množstve je prítomný na B lymfocytoch v lymfatických orgánoch av malom množstve na B-bunkách periférnej krvi. CD21 je receptor pre vírus Epstein-Barr.
• CD22 je proteín pozostávajúci z dvoch polypeptidových reťazcov. Vyjadruje sa na membráne väčšiny B-lymfocytov vrátane progenitorových buniek (prolymphocytov). Antigén nie je exprimovaný na B-lymfocytoch (plazmatické bunky) po ich aktivácii. Najvýraznejšia expresia CD22 je detegovaná na bunkách s leukémia vlasatých buniek, slabá - v myeloidných leukémiach a non-T-bunkách ALL.
• CD23 je glykoproteín exprimovaný aktivovanými B-lymfocytmi periférnej krvi v oveľa väčšom rozsahu. CD23 sprostredkúva cytotoxicitu a fagocytózu závislú od IgE makrofágmi a eozinofilmi.
• CD25 je jednoreťazcový glykoproteín identifikovaný ako receptor s nízkou afinitou pre IL-2. Tento receptor sa exprimuje na aktivovaných T-lymfocytoch a na nižšej hustote na aktivovaných B-bunkách. V periférnej krvi zdravých ľudí je antigén prítomný vo viac ako 5% lymfoidných buniek.
• CD29 je fibronektínový receptor. Je široko distribuovaný v tkanivách, je exprimovaný leukocytmi. Detekcia CD29 na periférnych krvinkách sa používa na typizáciu subpopulácie T buniek s fenotypom CD4 + CD29 +, ktoré sa nazývajú pomocníkom typu 2 (Th2). Tieto bunky prostredníctvom produkcie lymfokínov sa podieľajú na realizácii humorálnej imunitnej odpovede.
• CD33 je transmembránový glykoproteín. Je prítomný na povrchu buniek myeloidnej a monocytárnej série. Nachádza sa na povrchu monocytov a v menšej miere granulocytov periférnej krvi. Približne 30% buniek červenej kostnej drene exprimuje CD33, vrátane myeloblastov, promyelocytov a myelocytov. Antigén chýba na membránach pluripotentných kmeňových buniek. CD33 sa používa na charakterizáciu buniek v myeloidných leukémiách. Leukémiové bunky lymfatického a erytroidného pôvodu nevykazujú CD33.
• CD34 je fosfoglykoproteín, exprimovaný hematopoetickými progenitorovými bunkami, vrátane monopotéznych kmeňových buniek. Najvýraznejšia expresia Ar sa pozoruje u skorých progenitorov; keď bunky dozrievajú, prejde značka markera. CD34 sa tiež nachádza na endotelových bunkách. CD34 sa používa na charakterizáciu buniek pri akútnej myelogénnej a lymfoblastickej leukémii. Pri chronickej lymfocytovej leukémii a lymfómoch nie je detegovaná expresia CD34 antigénu.

• CD41a je exprimovaná doštičkami a megakaryocytmi. Monoklonálne protilátky na detekciu CD41a sa používajú na diagnostiku megakaryoblastickej leukémie. Pri Glązmannovej trombasténií je expresia tohto antigénu neprítomná alebo výrazne potlačená.
• CD42b je membránový glykoproteín skladajúci sa z dvoch polypeptidových reťazcov. Značka sa nachádza na povrchu krvných doštičiek a megakaryocytov. V klinickej praxi sa na diagnostiku trombocytopatie - Bernard-Soulierovho syndrómu používa detekcia CD42b.
• CD45RA patrí do triedy transmembránových glykoproteínov. Toto je bežný leukocytový antigén. Vyjadruje sa na bunkovej membráne B-lymfocytov, v menšom rozsahu T-lymfocytov a na zrelých medulárnych tymocytoch. Marker nie je exprimovaný granulocytmi.
• CD45RO je izoforma CD45RA s nízkou molekulovou hmotnosťou - bežný leukocyt Ag. Nachádzajú sa na T-bunkách (pamäťové T-lymfocyty), na subpopuláciách B-lymfocytov, monocytov a makrofágov. Monoklonálne protilátky proti CD45RO interagujú s väčšinou tymocytov, subpopuláciou pokojných CD4 + a CD8 + T-lymfocytov a zrelých aktivovaných T-buniek. Bunky myelomonocytického pôvodu, granulocyty a monocyty tiež nesú tento antigén. Zisťuje sa v centroblastických a imunoblastických lymfómoch.
• CD46-O-glykozylovaný dimér. To je široko distribuovaný v tkanivách a vyjadril T- a B-lymfocyty, monocyty, granulocyty, NK bunky, krvné doštičky, endotelové bunky, fibroblasty, ale je prítomné na povrchu erytrocytov. CD46 poskytuje ochranu tkaniva pred komplementárnym účinkom.
• CD61 je antigén doštičiek. Vyjadruje sa na krvných doštičkách periférnej krvi a červenej kostnej drene, ako aj na megakaryocytoch a megakaryoblastoch. Jeho definícia sa používa ako marker pre akútnu megakaryoblastickú leukémiu. Expresia antigénu chýba alebo je potlačená u pacientov s Glanzmannovou trombasténiou.
• CD95, nazývaný tiež Fas alebo APO-1, je transmembránový glykoproteín, ktorý je členom rodiny receptorov faktora nekrózy nádorov. Je exprimovaný vo významných množstvách na T-lymfocytoch periférnej krvi (CD4 + a CD8 +) a v menšej miere na B-lymfocytoch a NK bunkách. Tento antigén sa tiež exprimuje na granulocytoch, monocytoch, tkanivových bunkách a neoplastických bunkách. Väzba CD95 na ligand Fas (CD95L) indukuje apoptózu v bunkách.
• CD95L alebo Fas ligand, membránový proteín patriaci do rodiny receptorov faktora nekrózy nádorov. Tento antigén je exprimovaný cytotoxickými T lymfocytmi, NK bunkami a veľmi často nádorovými bunkami; hlavným induktorom apoptózy v bunkách.
• HLA-DR je monomorfný determinant molekúl triedy II hlavného ľudského histokompatibilného komplexu (HLA). Marker je exprimovaný na Langerhansových bunkách, dendritických bunkách lymfatických orgánov, niektorých typoch makrofágov, B lymfocytoch, aktivovaných T bunkách a epiteliálnych bunkách týmusu. Test na tento marker sa používa na kvantifikáciu aktivovaných T-lymfocytov s fenotypom CD3 + HLA-DR +.

Pomocou iného výberu monoklonálnych protilátok proti markerom je možné vytvoriť fenotypový portrét buniek charakteristických pre danú formu leukémie.

Okrem použitia imunofenotypizace techniky pre diagnostiku a diferenciálnu diagnostiku hematologických malignít, najmä dôležité ukázalo ich použitie v procese liečby na posúdenie stavu remisie a zostatkovej populácie leukemických buniek. Vedieť fenotypové "portrét" z vysokých buniek v čase stanovenia diagnózy, s týmito značkami je možné nájsť mobilný leukemické klon v remisii, az nárastu ich počtu - predvídať vývoj relaps dlhý (pre 1-4 mesiacov), kým jej klinickej a morfologické rysy.

[1], [2], [3], [4],