Karyotyping

Na štúdium chromozómov sa často používajú krátkodobé krvné kultúry, ako aj bunky kostnej drene a fibroblastové kultúry. Krv dodaná do laboratória s antikoagulantom sa podrobí centrifugácii na vyzrážanie červených krviniek a leukocyty sa inkubujú v kultivačnom médiu 2-3 dni. Do krvnej vzorky sa pridá fytohemaglutinín, pretože urýchľuje aglutináciu erytrocytov a stimuluje rozdelenie lymfocytov. Najvhodnejšou fázou pre štúdium chromozómov je metafáza mitózy, preto sa kolchicín používa na zastavenie delenia lymfocytov v tomto štádiu. Pridanie tohto liečiva do kultúry vedie k zvýšeniu podielu buniek, ktoré sú v metafáze, to znamená v štádiu bunkového cyklu, keď sa najlepšie pozorujú chromozómy. Každý chromozóm sa replikuje (produkuje vlastnú kópiu) a po vhodnom zafarbení je viditeľný vo forme dvoch chromatidov pripojených k centromére alebo centrálnej konstrikcii. Bunky sa potom ošetria hypotonickým roztokom chloridu sodného, fixujú sa a farbia.

Na farbenie chromozómov sa častejšie používa farbivo Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomín alebo 2% acetazarín. Farbiace chromozómy úplne, rovnomerne (rutinná metóda) a môžu byť použité na identifikáciu číselných anomálií ľudských chromozómov.

Pre získanie detailného obrazu štruktúry chromozómov, identifikácie (identifikácie) jednotlivých chromozómov alebo ich segmentov sa používajú rôzne metódy diferenciálneho farbenia. Najčastejšie používané metódy sú Giemsa, ako aj ohýbanie G a Q. Mikroskopické vyšetrenie lieku pozdĺž chromozómu odhaľuje sériu zafarbených (heterochromatínových) a nelakovaných pásov (euchromatín). Charakter prierezového prúžku získaný v tomto prípade umožňuje identifikovať každý chromozóm v súbore, pretože striedanie pruhov a ich rozmery sú striktne individuálne a konštantné pre každý pár.

Metafázové dosky jednotlivých buniek sú fotografované. Jednotlivé chromozómy sú odrezané z fotografií a vkladané na list papiera; takýto obraz chromozómov sa nazýva karyotyp.

Použitie dodatočného farbenia, ako aj nové metódy na získanie chromozómových preparátov, ktoré umožňujú napínanie chromozómov v dĺžke, významne zvyšujú presnosť cytogenetickej diagnostiky.

Na popísanie ľudského karyotypu bola vyvinutá špeciálna nomenklatúra. Normálny karyotyp muža a ženy je označený ako 46, XY a 46, XX. Pri Downovom syndróme, charakterizovanom prítomnosťou ďalšieho chromozómu 21 (trisómiu 21), je ženský karyotyp opísaný ako 47, XX 21+ a muži - 47, XY, 21+. V prítomnosti štrukturálnej anomálie chromozómu je potrebné označiť zmenené dlhé alebo krátke rameno: písmeno p označuje krátke rameno, q dlhé rameno a translokáciu. Takže, keď je krátke rameno chromozómu 5 (syndróm "mačka-krik") vypustené, ženský karyotyp je opísaný ako 46, XX, 5p-. Matka dieťaťa s translokáciou Downov syndróm - nosič vyváženej translokácie 14/21 má karyotyp 45, XX, t (14q, 21q). Translokačný chromozóm sa vytvorí, keď sa dlhé ramená chromozómu 14 a 21 zlúčia, zatiaľ čo krátke ramená sú stratené.

Každé rameno je rozdelené na okresy a naopak - na segmenty a tie a ostatné sú označené arabskými číslicami. Centromér chromozómu je východiskom pre počítanie regiónov a segmentov.

Na topografiu chromozómov sa používajú štyri markery: číslo chromozómu, symbol ramena, číslo okresu a číslo segmentu v danom regióne. Napríklad 6p21.3 záznam znamená, že hovoríme o 6. Chromozómu pár, svoje krátke rameno, oblasti 21, segmentu 3. Existuje viac voliteľných znakov, najmä pter - koniec krátkeho ramena, qter - na konci dlhého ramena.

Metóda cytogenetického výskumu umožňuje detegovať delécie a iné zmeny v chromozómoch len vo veľkosti približne 1 milión báz (nukleotidov).

[1], [2], [3], [4]