PCR ako metóda diagnostiky genetických ochorení
Posledná kontrola: 23.04.2024
Všetok obsah iLive je lekársky kontrolovaný alebo kontrolovaný, aby sa zabezpečila čo najväčšia presnosť faktov.
Máme prísne smernice týkajúce sa získavania zdrojov a len odkaz na seriózne mediálne stránky, akademické výskumné inštitúcie a vždy, keď je to možné, na lekársky partnerské štúdie. Všimnite si, že čísla v zátvorkách ([1], [2] atď.) Sú odkazmi na kliknutia na tieto štúdie.
Ak máte pocit, že niektorý z našich obsahov je nepresný, neaktuálny alebo inak sporný, vyberte ho a stlačte kláves Ctrl + Enter.
PCR je nový úspech v molekulárnej genetike, ktorý sa používa na amplifikáciu DNA a umožňuje špecifickú časť DNA (teda akýkoľvek požadovaný gén) rýchlo replikovať in vitro viac ako 200 000 krát. Na uskutočnenie reakcie postačuje mať DNA materiál jednej bunky; množstvo DNA amplifikovanej pomocou PCR je také veľké, že táto DNA môže byť jednoducho zafarbená (použitím rádioaktívnych sond po elektroforéze sa nevyžaduje). Predpokladom na vykonanie PCR je znalosť nukleotidovej sekvencie amplifikovanej DNA oblasti pre správny výber umelo syntetizovaných primérov.
V súčasnej dobe, PCR je proces, ktorý sa vyskytuje v jednej skúmavke a skladajúci sa z opakujúcich sa cyklov amplifikácie (reprodukcia, kópia) špecifických DNA sekvencií, aby sa získal dostatočne veľký počet kópií, ktoré môžu byť identifikované pomocou elektroforézy. Jedným z kľúčových súčastí reakcie - "priméry" - syntetické oligonukleotidy skladajúci sa z 20-30 báz komplementárnych "stránky" (oblasti), teplotná hybridizácia (spojenia) k identifikovateľné časti templátu DNA.
PCR sa postupuje automaticky v programovateľnom termostate - termocykle (termocykle). Trojstupňový cyklus, v dôsledku ktorého sa získajú presné kópie identifikovateľnej časti templátovej DNA, sa opakuje 30 až 50 krát v súlade s prednastaveným programom tepelného cyklu. V prvom cykle oligorámy hybridizujú s originálnou templátovou DNA a potom (v nasledujúcich cykloch) as novo syntetizovanými molekulami DNA, ktoré sa hromadia v reakčnej zmesi. V druhom prípade, syntéza DNA nekončí v dôsledku teplotných zmien, a pri dosiahnutí zosilneného hraničnú oblasť DNA polymerázu, ktorá určuje veľkosť novo syntetizovanej DNA oblasti, aby v rámci jedného nukleotidu.
Ako metóda detekcie získaných molekúl DNA sa používa elektroforéza, pomocou ktorej sa amplifikovaný materiál rozdelí podľa veľkosti amplikónov (amplifikačné produkty).
Pomocou PCR je možné priamo vyšetriť miesta lokalizácie podozrivých mutácií alebo polymorfných miest a tiež študovať prítomnosť akýchkoľvek iných špecifických znakov DNA.
[