Vírus hepatitídy B

Hepatitída B je infekčné ochorenie osoby charakterizované selektívnym poškodením pečene vírusom. Táto forma hepatitídy je najnebezpečnejšia v dôsledku všetkých známych foriem vírusovej hepatitídy. Jeho príčinným činidlom je vírus hepatitídy B (HBV).

Prvý antigén vírusu hepatitídy B bola zistená B. Blumberg v roku 1964 v sére austrálskom Aborigénmi a patogén bol nájdený v roku 1970, D. Dane (a kol.), A prijal meno Dane častíc, pretože nebolo isté, že , že je to naozaj vírus, nie jeho komponenty. Následne zmizli všetky pochybnosti, pretože v časticiach Dane sa našla genómová DNA a DNA polymeráza závislá od DNA. Virión obsahuje tri hlavné antigény, pre ktoré boli v roku 1974 zavedené tieto označenia:

• HBsAg je povrchový alebo rozpustný alebo austrálsky antigén.
• HBcAg je jadrový antigén (ko-antigén).
• HBeAg - e antigén, je lokalizovaný v jadre viriónu a, na rozdiel od HBcAg, je prítomný v viriónu nielen, ale aj cirkuluje v krvi vo voľnej forme alebo vo forme komplexu s anti-HBeAg. Je vylučovaný do krvi z hepatocytov s aktívnou replikáciou HBV.

Povrchový antigén - HBsAg - existuje vo forme troch morfologicky odlišných variantov: 1) predstavuje supercapsid celého viriónu; 2) vo veľkom množstve sa vyskytuje vo forme častíc s priemerom 20 nm, ktoré majú sférický tvar; 3) vo forme vlákien s dĺžkou 230 nm. Z chemického hľadiska sú totožné. Kompozícia má celkovú HBsAg antigén a dvoch párov vzájomne sa vylučujúcich determinant typovo špecifických: d / y a w / r, tak tam sú štyri hlavné podtyp HBsAg (a teda HBV): ADW, adr, ayw a aur. Antigén a poskytuje tvorbu spoločnej krížovej imunity voči všetkým podtypom vírusu.

Vlastne virión, Dainova častica, má sférický tvar a priemer 42 nm. Supercapsid viriónu pozostáva z troch proteínov: hlavný (hlavný), veľký a stredný. Genóm je uzavretý v kapside a je reprezentovaný dvojvláknovou prstencovou DNA s hmotnosťou 1,6 MD. DNA pozostáva z približne 3200 nukleotidov, ale jeho "plus" -non je o 20-50% kratší ako znamienko mínus. S 5 'koncom dlhého vlákna je vírusovo špecifický proteín kovalentne viazaný. 5 'konce oboch vlákien sú komplementárne a tvoria "lepkavé" sekvencie s dĺžkou 300 nukleotidov, takže vlákna sú uzavreté v kruhu. Obsah G + C vo viriónovej DNA je 48-49 mol.%. V jadre viriónu je okrem DNA genómu DNA-dependentná DNA polymeráza. "Mínus" -definovaná DNA HBV obsahuje len štyri gény (S, C, P a X), ale sú organizované veľmi kompaktne. Gény S, C, P, X sa silne prekrývajú a riadia syntézu nasledujúcich produktov. Gene S kóduje syntézu hlavného proteínu obalu a obsahuje všetky informácie o povrchovom antigéne HBsAg. Okrem toho kóduje syntézu stredných a veľkých obalových proteínov. Proteíny obsahujú spoločný koniec COOH, ale ich translácia začína tromi rôznymi iniciátorskými kodónmi. Kódy génu C pre syntézu kapsidových proteínov (HBcAg a HBeAg); aj keď tieto proteíny sú kódované jediným génom, spôsoby ich prekladu sú odlišné. Gene P je najväčší. Obsahuje časť všetkých troch iných génov a kóduje enzýmy potrebné na replikáciu vírusu. Konkrétne kóduje reverznú transkriptázu, doménu enzýmu RNA-ase H, 5'-koncový proteín "mínusovej" reťazca. Gene X kóduje proteíny, ktoré regulujú expresiu (expresiu) všetkých vírusových génov, najmä proteín s hmotnosťou 17 kD, čo je génový transkripčný transaktivátor.

Proteíny, ktoré tvoria povrchový antigén, existujú v glykozylovanej (gp) a neglykozylovanej forme. Glykozylované sú gp27, gp33, gp36 a gp42 (čísla sú označené m v kD). Supercapsid HBV pozostáva z hlavného alebo základného S-proteínu (92%); priemerný proteín M (4%) a veľký alebo dlhý L-proteín (1%).

• Hlavnou zložkou obalu HBV je hlavný proteín, p24 / gp27 alebo hlavný proteín (proteín S). V neprítomnosti iných proteínov z obalov polymerizuje a vytvára sférické častice s priemerom 20 nm, ktoré pozostávajú zo 100 polypeptidových molekúl.
• Veľký proteín, p39 / gp42 alebo dlhý proteín (proteín L), je prítomný vo všetkých troch formách HBsAg. Zohráva dôležitú úlohu v morfogenéze viriónov a pri ich výstupe z bunky. L-proteín obsahuje sekvenciu M-proteínu, ktorá je doplnená o N-koncových sekvencií 108 (ayw), alebo 119 (ADW, adr, Ayr) aminokyselinové zvyšky kódované NPE-Sl-S-oblasť génu.
• Stredný proteín - gp33 / gp36 alebo proteín M je tiež prítomný vo všetkých troch morfologických formách HBsAg. Proteín M obsahuje na N-konci 55 aminokyselinových zvyškov kódovaných pre-52 oblasťou S génu. Predpokladá sa, že toto miesto hrá dôležitú úlohu pri rozpoznávaní vírusu hepatitídy B pečeňovými bunkami obmedzeného rozsahu hostiteľov (ľudská, šimpanzová opica). Proteínové sekvencie kódované oblasťami S-génu npe-S majú vysokú imunogenicitu a ich determinanty sú umiestnené na povrchu viriónu. Preto protilátky proti týmto antigénom hrajú dôležitú úlohu pri tvorbe imunity proti hepatitíde B.

Syntéza vírusových proteínov je prísne kontrolovaná na úrovni transkripcie a translácie. V transkripcii vírusového genómu sa syntetizujú dva typy mRNA:

• menšie - 2100 nukleotidov - kóduje hlavný a stredný proteín membrány;
• veľký - 3500 nukleotidov, t.j. Dlhší ako samotná genómová DNA; obsahuje terminálne opakovania s dĺžkou 100 nukleotidov.

Tento druh mRNA kóduje kapsidový proteín a produkty génu P. Je tiež templátom pre replikáciu vírusovej DNA. Ako súčasť genómu existujú zosilňovače (transkripčné zosilňovače) - regulačné prvky, ktoré aktivujú expresiu všetkých vírusových génov a pôsobia primárne v pečeňových bunkách. Najmä gén S sa exprimuje na veľmi vysokej úrovni len v pečeňových bunkách a pod vplyvom steroidných hormónov. Táto okolnosť vysvetľuje, prečo sa u mužov pozoruje chronická hepatitída B a rakovina pečene (hepatóm) častejšie ako u žien, ktoré majú nižšiu hladinu steroidných hormónov.

Ďalšie regulačné prvky vírusu hepatitídy B modulujú (kontrolujú) hladiny syntézy jednotlivých proteínov. Napríklad veľký proteín sa syntetizuje len v malých množstvách. Väčšina z nich je na povrchu infekčných viriónov. A hlavný proteín a v menšej miere stredný proteín sa syntetizujú v obrovských množstvách a nechávajú bunky v povrchových časticiach antigénu, ktoré v sére obsahujú mnohokrát viac ako dospelé virióny. Počet častíc povrchového antigénu môže byť 1011 až 1013 na 1 ml krvi (niekoľko stoviek μg).

Vírus hepatitídy B je izolovaný v novej rodine vírusov - Hepadnaviridae, rodu Orthohepadnavirus. Podobné hepadnavírusy boli nájdené na rôznych zvieratách (zemné proteíny, svišťovia, chipmunky, pekingské kačky).

Reprodukcia hepadnavírusov sa uskutočňuje neobvyklým spôsobom. Najmä replikácia genómovej DNA prebieha cez medziprodukt - RNA, tj s mechanizmom reverznej transkripcie.

Životný cyklus vírusu hepatitídy B.

• Adsorpcia na bunke.
• Penetrácia do bunky cez receptorom sprostredkovanú endocytózou mechanizmu (ohraničený boxoch -> ohraničený fľaštičky -> -> lysozomy výstupu nukleokapsidového a vstupu vírusového genómu do hepatocytov jadra).
• Intracelulárna reprodukcia.

Pri penetrácii do bunky sa krátky ("plus") reťazec DNA predlžuje (dokončí). V jadre syntetizuje bunková DNA-dependentná RNA polymeráza RNA s veľkosťou 3500 nukleotidov (pregenes) a menších mRNA na syntézu vírusových proteínov. Potom sa pregenová a vírová DNA polymeráza zabalí do novo syntetizovanej kapsidy, ktorá sa prenesie do cytoplazmy. Tu nastáva opačná transkripcia pregenómu. Syntetizuje novú "mínusovú" DNA. Po dokončení syntézy mínus DNA je pregenómová RNA zničená. Viriónová DNA polymeráza na "mínusovom" reťazci syntetizuje "plus" reťazec. Vírusová DNA, teraz dvojitá, môže existovať v bunke dlhú dobu a vrátiť sa do jadra pre ďalší replikačný cyklus. Ak je nový vírus častice nie je podrobený ďalšiemu replikácie, nukleokapsidový pripravený vedením cez bunkovú membránu, sa vzťahuje superkapsidom, bud z bunky, a to ihneď zastavil rozšírenie "a" a-reťazec DNA. Preto sa dĺžka tohto vlákna mení. V typickom akútnej formy hepatitídy B sérologických markerov týchto postupne sa objaví v krvi: HBsAg, HBeAg a protilátky (IgM, IgG): anti-HBcAg. Anti-HBeAg a anti-HBsAg.

Zloženie vírusu hepatitídy B majú onkogén, ale zistili, že preniká do bunkového chromozómu (vo svojich rôznych častiach), vírusová DNA možno indukovať v nich odlišné genetickej úpravy - odstránenie, translokácia, zosilnenie, čo môže spôsobiť vývoj rakoviny pečene - jedno najzávažnejších dôsledkov vírusovej hepatitídy B.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8],

Odolnosť vírusu hepatitídy B

Vírus hepatitídy B je vysoko odolný. Pri izbovej teplote zostáva životaschopný po dobu 3 mesiacov, v zmrazenom stave - niekoľko rokov. Vírus sa kompletne inaktivuje v autokláve (120 ° C) pri teplote spätného toku po dobu 30 minút, sa suchým teplom pri teplote 180 "C počas 60 minút, pri 60 ° C. - 10 hodín rezistentným v kyslom prostredí, ale je zničený v alkalickom. Vírus zomrie pri pôsobení H202, chloramínu, formalínu, fenolu a UV ožarovaním.

Patogenéza a symptómy hepatitídy B

Vírus je hematogénne injikovaný priamo do pečene. V patogenéze hepatitídy zohrávajú dôležitú úlohu autoimunitné humorálne a bunkové odpovede. Predpokladá sa, že strata hepatocytov v dôsledku nie toľko, aby priamym pôsobením samotného vírusu, ale s hostiteľskými imunologické reakcie, ktoré sa vyskytujú v súvislosti s modifikáciou bunkovej membráne vírusové proteíny, ktoré indukujú vzhľad autoprotilátok na pečeňových buniek. Preto môže byť chronická hepatitída a cirhóza pečene považovaná za autoimunitnú chorobu.

Bunkové autoimunitné reakcie na vírusové proteíny obsiahnuté v membráne hepatocytov sú sprostredkované T-cytotoxickými lymfocytmi a inými hepatickými zabíjačskými bunkami. Preto môže byť akútna dystrofia pečene považovaná za reakciu odmietnutia zvláštneho heterografu.

Doba inkubácie trvá od 45 do 180 dní, v priemere 60 až 90 dní. Klinický priebeh hepatitídy B je charakterizovaný veľkou rôznorodosťou; choroba sa môže vyskytnúť: v latentnej forme, zistenej len laboratórnymi metódami, v typickej ikterickej forme av malígnej forme, ktorá končí smrteľná. Trvanie štádia pred žltačkou sa pohybuje od jedného dňa do niekoľkých týždňov. Ikterické doba je zvyčajne dlhá a vyznačuje sa dobre definovaných symptómov (žltačka, hyperbilirubinémia, tmavý moč, žltačka skléry). Dlhodobá forma je pozorovaná u 15-20% pacientov a 90% z nich sa vyvinie chronická hepatitída B. Pacienti s chronickou formou často pozorované autoimunitné procesy sú sprevádzané vysokým obsahom protivopechenochnyh protilátok, ktoré sú detekovaná enzyme-linked ImmunoSorbent assay (IPM). U detí je hepatitída B mierna a často bez žltačky, u malých detí - väčšinou bez symptómov.

Postinfekčná imunita (humorálna a bunková) je dlhá, celoživotná kvôli vírusom neutralizujúcim protilátkam (anti-HBsAg) v neprítomnosti povrchového antigénu v krvi. Často pozorovaná latentná imunizácia v dôsledku opakovaného kontaktu s HBV, čo je príčinou rozšírenej imunity voči vírusu u populácie. Zvyčajne sa pacienti s akútnou formou hepatitídy B zotavia úplne, keď sa do nich nahromadia protilátky. Avšak v niektorých prípadoch napriek vysokej úrovni vírusového antigénu v krvi (okolnosť, ktorá vysvetľuje, prečo sa parenterálna infekcia vyskytuje najčastejšie) sa protilátky proti nemu nevytvárajú. Vírus zostáva v pečeni a človek sa dlho, niekedy na celý život, stáva chronickým nosičom. Táto okolnosť je samozrejme spojená so slabou imunitnou odpoveďou. Jedným z najbežnejších výsledkov chronickej hepatitídy B je cirhóza a rakovina pečene, ktoré sa vyvíjajú po latentnom období až 30-50 rokov.

Epidemiológia hepatitídy B

Zdrojom infekcie vírusom hepatitídy B je iba osoba. Na rozdiel od predchádzajúcich reprezentáciou, že infekcia vírusom hepatitídy B sa vyskytuje výhradne parenterálnej cestou, je teraz dokázané, že sa vyskytuje v rôznych sekrétov a exkrementov:. Sliny, nosohltanu sekréty, výkaly, slznej tekutiny, spermy, menštruačnej krvi, atď Preto, infekcia sa vyskytuje nielen parenterálnej cestou, ale aj sexuálne a vertikálne (z matky na plod), t. J. V podstate infekcia vírusom hepatitídy B môže byť v mnohých ohľadoch.

Hepatitída B na svete zabila toľko ľudí, ako počas celého obdobia druhej svetovej vojny. Počet nosičov HBV podľa WHO je od 0,1 do 20% populácie rôznych krajín alebo regiónov.

[9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16],

Diagnóza hepatitídy B

V súčasnosti je hlavnou metódou diagnostiky hepatitídy B použitie spätnej pasívnej hemaglutinácie (ROSGA) na detekciu vírusu alebo jeho povrchového antigénu, HBsAg. Ako už bolo uvedené, krv povrchového antigénu obsahuje mnohokrát viac ako samotný vírus (100 až 1000 krát). Pri reakcii ROPGA sú erytrocyty senzibilizované protilátkami proti vírusu hepatitídy B. Ak je v krvi prítomný antigén, dôjde k hemaglutinácii. ROPGA je jednoduchý, pohodlný, veľmi špecifický. Na detekciu protilátok proti vírusu HBsAg sa používajú rôzne imunologické metódy (DSC, RPGA, IFM, RIM atď.). Okrem toho sa na detekciu HBV a jeho antigénov používajú PCR varianty.

Na detekciu protilátok na vírusový antigén (HBsAg) v sére pacienta (DSC, RPGA, zrážacia reakcia, IFM, RIM atď.) Sa môžu použiť rôzne imunologické metódy.

[17], [18], [19], [20], [21], [22],

Špecifická prevencia hepatitídy B

Vzhľadom na vysoký výskyt hepatitídy B a tiež na to, že na svete existuje veľa nosičov HBV, očkovanie WHO proti hepatitíde B je povinné a musí sa vykonať v prvom roku života. Pre očkovanie sa odporúčajú dva typy vakcín. Na prípravu jednej z nich sa ako surovina používa plazma nosičov vírusov, pretože vírusový antigén v nej je obsiahnutý v množstvách dostatočných na prípravu vakcíny. Hlavnou podmienkou na prípravu tohto typu vakcíny je úplná bezpečnosť, t.j. úplná inaktivácia vírusu, ktorá je poskytovaná technológiou prípravy vakcín. Na výrobu vakcíny iného typu sa používajú metódy genetického inžinierstva, najmä na prípravu antigénneho materiálu sa použije rekombinantný klon kvasiniek, ktorý produkuje povrchový antigén vírusu hepatitídy B.

Obe vakcíny sú vysoko účinné (chráni 95% očkovaných). Trvanie postvakcinačnej imunity nie je kratšie ako 5-6 rokov. Očkovacie látky boli vytvorené tak pre dospelých, ako aj pre dojčatá a malé deti - najdôležitejšiu súčasť globálneho boja proti hepatitíde B. Celý priebeh očkovania pozostáva z troch injekcií:

I dávku - ihneď po narodení; II dávka - po 1 - 2 mesiacoch; III dávka - do konca prvého roka života.

Tieto vakcíny zahrnuté do rozšíreného programu imunizácie, WHO a zladený s kalendárom jej vykonávania (v súlade s odporúčaniami Svetovej zdravotníckej organizácie v 1. Roku života sa vykonáva očkovanie proti tuberkulóze, detskej obrne, hepatitíde B, osýpkam, tetanu, záškrtu, čiernemu kašľu).

Gammaglobulín, obsahujúci protilátky proti HBV, sa používa na núdzovú pasívnu imunoprofylaxiu u osôb, ktoré mali kontakt s pacientom s hepatitídou typu B.

Na liečbu hepatitídy B (akútne a chronické formy) používajte interferón a amixín (na indukciu jeho endogénnej syntézy). Pri liečbe chronickej hepatitídy B je účinný nový liek lamivudín (syntetický nukleozid).