Analýza polymorfizmu dĺžky reštrikčných fragmentov
Posledná kontrola: 23.04.2024
Všetok obsah iLive je lekársky kontrolovaný alebo kontrolovaný, aby sa zabezpečila čo najväčšia presnosť faktov.
Máme prísne smernice týkajúce sa získavania zdrojov a len odkaz na seriózne mediálne stránky, akademické výskumné inštitúcie a vždy, keď je to možné, na lekársky partnerské štúdie. Všimnite si, že čísla v zátvorkách ([1], [2] atď.) Sú odkazmi na kliknutia na tieto štúdie.
Ak máte pocit, že niektorý z našich obsahov je nepresný, neaktuálny alebo inak sporný, vyberte ho a stlačte kláves Ctrl + Enter.
Široké použitie rôznych reštrikčných endonukleáz na analýzu chromozomálnej DNA odhalilo obrovskú variabilitu ľudského genómu. Aj malé zmeny v kódovacích a regulačných oblastiach štrukturálnych génov môžu viesť k ukončeniu syntézy určitého proteínu alebo k strate jeho funkcie v ľudskom tele, ktoré zvyčajne ovplyvňujú fenotyp pacienta. Avšak približne 90% ľudského genómu pozostáva z nekódujúcich sekvencií, ktoré sú viac variabilné a obsahujú mnoho takzvaných neutrálnych mutácií alebo polymorfizmov a nemajú fenotypovú expresiu. Takéto polymorfné miesta (lokusy) sa používajú pri diagnostike dedičných ochorení ako genetických markerov. Polymorfné lokusy sú prítomné vo všetkých chromozómoch a sú spojené so špecifickou oblasťou génu. Po určení lokalizácie polymorfného lokusu je možné určiť, s ktorým genómom je spojená mutácia, ktorá spôsobila ochorenie u pacienta.
Na izoláciu polymorfných oblastí DNA sa používajú bakteriálne enzýmy - reštrikčné enzýmy, ktorých produktom sú reštrikčné miesta. Spontánne mutácie, ktoré sa vyskytujú v polymorfných miestach, spôsobujú, že sú odolné alebo naopak citlivé na pôsobenie špecifického reštrikčného enzýmu.
Mutačná variabilita v reštrikčných miestach môže byť detekovaná zmenou dĺžky fragmentov DNA s obmedzenou separáciou pomocou elektroforézy a následnej hybridizácie so špecifickými DNA sondami. V neprítomnosti obmedzenia v polymorfnom mieste sa na elektroforegoch deteguje jeden veľký fragment a ak je prítomný, bude prítomný menší fragment. Prítomnosť alebo neprítomnosť reštrikčného miesta v identických miestach homológnych chromozómov umožňuje spoľahlivé označenie mutantného a normálneho génu a sledovanie jeho prenosu na potomstvo. Preto v štúdii DNA pacientov, u obidvoch chromozómov, ktorých reštrikčné miesto je prítomné v polymorfnej oblasti, budú na elektroforegre odhalené krátke fragmenty DNA. U pacientov homozygotných na mutáciu, ktorá modifikuje polymorfné reštrikčné miesto, budú detegované fragmenty väčšej dĺžky a v heterozygotných fragmentoch budú identifikované krátke a dlhé fragmenty.
[