Testy na ľudský papilomavírus: ako sa robia, dekódovanie

Ľudský papilomavírus predstavuje vážnu hrozbu. Diagnostika je nevyhnutná na určenie kmeňa infekcie a rizika jej onkogénnosti. Takéto informácie nám umožňujú vytvoriť najvhodnejší a najúčinnejší liečebný plán.

Vysokokvalitnú diagnostiku vykonáva niekoľko špecialistov súčasne. Hlavné indikácie na vyšetrenie tela sú:

• Aktívny sexuálny život a častá zmena sexuálnych partnerov.
• Svrbenie, pálenie v oblasti genitálií, atypický výtok.
• Výskyt nových výrastkov na koži a slizniciach vo forme papilómov, bradavíc a kondylómov.

Diagnóza papilomavírusu pozostáva z komplexu laboratórnych a inštrumentálnych metód:

• Vizuálne vyšetrenie a zber anamnézy – lekár vyšetrí postihnuté oblasti a pýta sa, kedy sa prvýkrát objavila vyrážka alebo iné príznaky HPV. Posúdi typ a tvar novotvarov. Ak sú prítomné anogenitálne výrastky, vykoná sa vyšetrenie krčka maternice a uretroskopia.
• Cytologické vyšetrenie náterov a šrotov – vykonáva sa na stanovenie morfologických zmien na bunkovej úrovni spojených s HPV. Presnosť tejto metódy závisí od techniky odberu materiálu a kvalifikácie laboratórnych technikov.
• Kolposkopia je vyšetrenie sliznice na detekciu subklinických foriem infekcie. Diagnóza je potvrdená prítomnosťou nasledujúcich faktorov: leukoplakia, mozaika, punkcia, zóna abnormálnych transformácií.
• Biopsia je odobratie malého množstva postihnutého tkaniva na mikroskopické vyšetrenie. Zvyčajne sa vykonáva pri podozrení na postihnutie krčka maternice.
• Histologické vyšetrenie – materiál získaný biopsiou sa posiela na laboratórne vyšetrenie na identifikáciu prekanceróznych stavov a iných bunkových abnormalít.
• PCR – vykonáva sa na identifikáciu jednotlivých typov HPV. Na diagnostiku sa používa krv, moč, hlien a iné tkanivové tekutiny.
• Digene test je jednou z najspoľahlivejších diagnostických metód. Má vysokú citlivosť na ľudský papilomavírus. Umožňuje určiť genotyp a jeho príslušnosť k vysoko onkogénnej alebo nízko onkogénnej skupine.

Dnes existuje mnoho metód, ktoré umožňujú zistiť HPV infekciu a určiť stupeň jej agresivity.

Skríning na ľudský papilomavírus

Povinným testom pre pacientov s predispozíciou k malígnym procesom v tele je skríning. Ľudský papilomavírus je tiež dôvodom na absolvovanie tohto laboratórneho testu.

Prvý skríning sa odporúča ženám vo veku 30 rokov. Analýza je potrebná nielen na detekciu papilomavírusu, ale aj na prevenciu erozívnych lézií krčka maternice spojených s HPV.

Najčastejšie sú pacientom predpísané nasledujúce typy skríningu:

• Cytologický PAP test – na štúdiu sa používa ster z krčka maternice umiestnený v tekutom médiu. Pomáha identifikovať onkologické kmene HPV v ranom štádiu vývoja.
• Rozšírená – identifikuje genotypy s vysokou onkogenitou a ich koncentráciu v tele.
• Polymerázová reťazová reakcia má vysokú diagnostickú hodnotu, pretože umožňuje identifikovať všetky typy ľudského papilomavírusu.

Skríning HPV sa vykonáva počas diagnostiky ochorenia, ako aj počas liečby a na vyhodnotenie výsledkov liečby.

Test na ľudský papilomavírus

Ak existuje podozrenie na papilomavírus, všetkým pacientom sa predpíše súbor diagnostických postupov. Analýza HPV je určenie typu vírusu v laboratórnom prostredí. Na štúdiu sa používajú rôzne biologické tekutiny a tkanivá.

Najčastejšie sa na analýzu odoberá ster z genitálií. Odber materiálu z tejto oblasti je potrebný aj pri absencii vizuálnych príznakov papilomatózy. Výsledná biopsia sa vyšetrí pod mikroskopom na prítomnosť epitelových buniek zmenených vírusom. Na základe diagnostických výsledkov sa určí typ infekcie a riziko jej onkogénnosti.

Pri plánovaní tehotenstva je povinné absolvovať test na papilomatóznu infekciu, aby sa zistili príčiny neplodnosti a patológie tehotenstva. V tomto prípade sa test predpisuje obom partnerom naraz. Je to spôsobené tým, že vírus sa prenáša počas intímneho kontaktu. Na základe výsledkov štúdie môže lekár predpísať ďalšie diagnostické metódy a vypracovať liečebný plán.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]

Kvantitatívna analýza ľudského papilomavírusu

Na detekciu papilomavírusu, určenie jeho typu a stupňa aktivity sa vykonáva kvantitatívna analýza. Existuje niekoľko metód na stanovenie HPV, zvážme ich:

1. Polymerázová reťazová reakcia – PCR je štandardom pre diagnostiku HPV. Analýza je založená na zvýšení počtu kópií vírusovej DNA v biopsii. Táto metóda umožňuje detekciu aj jednotlivých typov vírusu s vysokou presnosťou.
2. Digene test – zvláštnosťou tejto metódy je spoľahlivá detekcia genotypov so zvýšenou onkogenitou. Na analýzu sa používajú rôzne biologické tekutiny a materiály.
3. Stanovenie prítomnosti vírusových protilátok - analýza odhaľuje špecifické proteíny imunitného systému. Každý vírusový agens, ktorý vstúpi do tela, podporuje produkciu jedinečných imunoglobulínov. Ak sa v krvnom sére zistia protilátky proti ľudskému papilomavírusu, naznačuje to infekciu tela.

Na vykonanie kvantitatívnej analýzy sa používa kapilárna krv (z prsta), stery z kože a slizníc a tkanivové biopsie. 12 hodín pred vykonaním testov by ste mali prestať užívať antimykotiká, antivírusové, antimikrobiálne a iné lieky vrátane antikoncepcie. V deň diagnózy sa musíte osprchovať a dôkladne si umyť intímne partie, ak sa z nich odoberajú stery. Taktiež 2-3 dni pred zákrokom by ste sa mali zdržať pohlavného styku.

Ošetrujúci lekár interpretuje získané výsledky. Lekár berie do úvahy nielen údaje z vykonanej diagnostiky, ale aj klinické prejavy ochorenia. V opačnom prípade môžu byť výsledky nesprávne interpretované.

DNA ľudského papilomavírusu, PCR

Jednou z najbežnejších a najspoľahlivejších metód na detekciu DNA ľudského papilomavírusu je PCR. Na vykonanie polymerázovej reťazovej reakcie sa používajú rôzne biologické materiály: krv, moč, nátery zo sliznice, plodová voda. Analýza umožňuje zistiť prítomnosť infekcie, aj keď je v tele latentná.

Princíp tejto diagnostickej metódy je založený na izolácii ľudskej a vírusovej DNA. Akákoľvek deoxyribonukleová kyselina pozostáva zo štyroch nukleotidov:

• A – adenín.
• T – tymidín.
• G – guanín.
• C – cytozín.

Podľa pravidiel genetiky majú určité poradie kombinácií: A+T, G+C. Všetky živé organizmy majú svoju vlastnú DNA, ktorú je možné izolovať. PCR rozpoznáva fragmenty patogénnej DNA, čím izoluje patogén.

Výhody PCR:

1. Univerzálnosť – okrem ľudského papilomavírusu možno počas štúdie zistiť mnoho ďalších patogénov infekčných chorôb.
2. Vysoká citlivosť – okrem určenia prítomnosti vírusu metóda určuje jeho typ a ďalšie charakteristiky.
3. Účinnosť – spoľahlivo identifikuje požadovanú infekciu.
4. Výsledky testu rýchlosti je možné získať do 24 hodín od vykonania testu.

Príprava na analýzu:

• Týždeň pred plánovaným testom by ste mali prestať užívať antikoncepčné tabletky, pretože môžu ovplyvniť výsledky.
• Štúdia sa nevykonáva počas menštruácie a 3 dni po nej.
• Dva dni pred testom by ste sa mali vyhýbať pohlavnému styku.
• Diagnostika sa vykonáva na lačný žalúdok, posledné jedlo by malo byť 12 hodín pred analýzou. Môžete však piť vodu.
• V deň vykonania PCR testu na HPV sa neodporúča vykonávať hygienické postupy ani ísť na toaletu dve hodiny pred odberom materiálu.

Získané výsledky by mal interpretovať lekár. Indikátor do 3 Lg je nevýznamná koncentrácia patogénu, 3-5 Lg je klinicky významná koncentrácia a viac ako 5 Lg je vysoká. Za normálnych okolností by všetky kvantitatívne titre mali byť negatívne. Negatívne výsledky však nie vždy naznačujú neprítomnosť ochorenia. Toto sa často pozoruje pri nevýznamných koncentráciách vírusu v tele a keď je potlačený imunitným systémom.

Napriek všetkým výhodám má PCR množstvo nevýhod. Analýza by sa mala vykonávať iba v modernom laboratóriu, aby sa predišlo falošným výsledkom. Osobitná pozornosť by sa mala venovať odberu materiálu. Výsledky by mal dešifrovať iba lekár, pretože pozitívne výsledky sa môžu vyskytnúť po nedávnej liečbe infekcie.

Škrabanie na ľudský papilomavírus

Na zistenie genitálnej HPV infekcie u mužov sa vykonáva zoškrabovanie, teda Digene test. Materiál sa odoberá z močovej rúry pomocou špeciálnej kefky; v niektorých prípadoch sa tkanivo odoberá z penisovej hlavy. Pred testom sa musíte osprchovať a dôkladne umyť. Porušenie osobnej hygieny negatívne ovplyvňuje výsledky testu.

U žien sa odoberá škrabanie z krčka maternice, ak existuje podozrenie na dyspláziu, eróziu a iné patologické procesy spôsobené HPV. Na odber materiálu lekár odstráni vaginálny výtok a vloží do orgánu malú kefku, ktorú otáča okolo osi v krčkovom kanáli. Po všetkých manipuláciách sa kefka umiestni do skúmavky s médiom a odošle sa do laboratória.

Získané materiály sa odosielajú na diferenciálnu diagnostiku metódou PCR; cytologický skríning sa nevykonáva. Výsledky sú pripravené 2-3 dni po analýze. Získané údaje predstavujú kompletnú informáciu o type vírusu, jeho karcinogenite a mnohých ďalších faktoroch priebehu ochorenia. Ak sú výsledky nesprávne, štúdia sa vykoná znova. Opakovaný skríning je potrebný počas liečby a po liečbe, aby sa zistila jej účinnosť.

Stery na ľudský papilomavírus

Ak sa počas gynekologického vyšetrenia v oblasti genitálií zistia bradavice alebo kondylómy, lekár odoberie ster na HPV. Lekár prejde špeciálnym štetcom po postihnutých tkanivách. Stery sa odoberajú z krčka maternice u žien a z močovej trubice u mužov. Odobratý biopsický materiál sa odošle na vyšetrenie do laboratória.

Pri podozrení na ľudský papilomavírus sa používajú tieto typy náterov:

• PCR – detekuje DNA infekcie. Na vykonanie tejto analýzy sa u mužov odoberá šupka z močovej rúry, u žien z vagíny a krčka maternice. Môže sa použiť aj spermie alebo moč.
• Digene testovanie je štúdium odobratého materiálu na molekulárnej úrovni. Testovanie je diferenciáciou dvoch skupín papilomainfekcií súčasne - s vysokou a nízkou onkogenitou.

Vyššie uvedené štúdie klasifikujú výsledky do 5 typov:

1. Absencia atypických buniek.
2. Prítomnosť zmenených buniek v dôsledku zápalového procesu.
3. Minimálny počet buniek s atypickou štruktúrou.
4. Zhubné bunky.
5. Veľké množstvo onkogénnych buniek.

Existuje aj klasifikácia podľa systému Bethesda. Pozostáva z indikátorov nízkeho a vysokého stupňa zmien. V tomto prípade je dekódovanie náteru prezentované nasledujúcimi údajmi:

• NILM – normálny epitel.
• ASCUS – zmenené bunky v dôsledku dysplázie, zápalu, pohlavne prenosnej infekcie alebo HPV.
• ASC-H – boli zistené abnormality v štruktúre dlaždicového epitelu. Tento výsledok naznačuje skoré štádiá onkológie alebo ťažkú dyspláziu.
• LSIL – v nátere je prítomný malý počet zmenených buniek. Indikuje dyspláziu alebo papilomavírus.
• HSIL – významné zmeny v epiteli. Závažná dysplázia a výrazná onkológia. Ak sa tento výsledok ignoruje, u 7 % pacientov sa v priebehu 3 – 5 rokov vyvinie malígne ochorenie.
• AGC je atypický glandulárny epitel. Vyskytuje sa pri rakovine maternice alebo dysplázii.
• AIS – skoré štádiá onkológie.
• Vysokostupňový SIL – spinocelulárny karcinóm.

Rýchlosť získania výsledkov náteru závisí od zvolenej výskumnej metódy. Dešifrovanie je spravidla pripravené do 2-3 dní.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]

Protilátky proti ľudskému papilomavírusu

Na detekciu protilátok proti HPV je indikovaný enzýmový imunotest krvi. Princípom tejto štúdie je stanovenie prítomnosti imunoglobulínov proti infekčnému agensu. Diagnostika pomocou metódy ELISA indikuje imunitnú odpoveď tela na vírus. V závislosti od zistených protilátok sa rozlišujú nasledujúce štádiá ochorenia:

• IgM – akútny.
• IgG – chronické alebo obdobie zotavenia.
• IgA – relaps chronickej infekcie.

Výsledky testu na protilátky sú pripravené 1-3 dni po jeho odobratí. Pri dešifrovaní výsledkov treba vziať do úvahy, že ľudský papilomavírus môže byť nepriamou stopou, preto sa vykonáva PCR a ďalšie testy na objasnenie prítomnosti infekcie. Okrem toho ELISA nestanovuje genotyp ani riziko karcinogenity vírusu.

[ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ], [ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]