Konfokálna mikroskopia

Konfokálna mikroskopia sa v súčasnosti považuje za jednu z najsľubnejších metód zobrazovania kože in vivo, a preto je o ňu nezvyčajne vysoký záujem medzi klinickými lekármi aj zástupcami výskumných ústavov.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Možnosti konfokálnej mikroskopie

V dermatológii sa konfokálna laserová mikroskopia používa na:

• štúdium prenikania zlúčenín do kože (cesty prenikania, kinetika, distribúcia v koži);
• pozorovanie fungovania žliaz (určenie aktívneho a pasívneho stavu);
• štúdie mikrocirkulačného lôžka (vrátane štúdií v reálnom čase);
• diagnostika novotvarov.

Bez toho, aby sme rozoberali výhody a nevýhody vyššie uvedených typov konfokálnej mikroskopie, poznamenávame, že v posledných rokoch sa fluorescenčná laserová konfokálna mikroskopia stala čoraz populárnejšou.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokálna mikroskopia na vyšetrenie kože

Konfokálny mikroskop poskytuje dve neoceniteľné možnosti - štúdium tkanív na bunkovej úrovni v stave fyziologickej životnej aktivity a demonštráciu výsledkov štúdie (t. j. bunkovej aktivity) v štyroch rozmeroch - výška, šírka, hĺbka a čas. Pre kvalitu obrazu a hĺbku štúdie zohráva najdôležitejšiu úlohu schopnosť tkaniva prepúšťať svetlo, inými slovami, jeho priehľadnosť. Metóda konfokálnej mikroskopie je bezkontaktná, svetelný lúč nespôsobuje žiadnu ujmu ani nepohodlie vyšetrovanému pacientovi ani experimentálnemu zvieraťu.

Na vyšetrenie kože sa používa konfokálna skenovacia laserová mikroskopia (CSLM). Metóda umožňuje vidieť epidermis a papilárnu vrstvu dermis s rozlíšením blízkym histologickému. Všetky výsledky vyšetrenia sa zobrazujú na monitore a ukladajú sa ako balík obrazových súborov (ako mikrofilm (v dynamike) alebo mikrofotografie).

Existujú dva typy metódy:

• reflexný (reflexný CSLM) - založený na skutočnosti, že rôzne intracelulárne a medzibunkové štruktúry majú rôzne indexy lomu svetla, čo umožňuje získať kontrastný obraz.
• fluorescencia (fluorescencia CSLM) - využíva laserové svetlo, ktoré preniká cez kožu a excituje v nej exo- alebo endochromofóry, ktoré v reakcii začnú emitovať fotóny (t. j. fluoreskujú).

Laterálne rozlíšenie je minimálna vzdialenosť medzi bodmi nachádzajúcimi sa v horizontálnej rovine, teda rovine rovnobežnej s povrchom kože. Axiálne rozlíšenie je minimálna vzdialenosť medzi bodmi nachádzajúcimi sa v rovine kolmej na povrch kože.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

História konfokálnej mikroskopie

Myšlienka vytvorenia mikroskopu schopného zobraziť rez živého tkaniva na bunkovej úrovni sa aktívne rozvíjala pred 130 rokmi. Hlavným prvkom moderných mikroskopov bol navrhnutý koncom 19. storočia a bol to rotujúci disk s drobnými otvormi usporiadanými do špirály. Tento disk vynašiel v roku 1883 nemecký študent Paul Nipkow, po ktorom bol pomenovaný - Nipkowov disk (alebo Nipkowov disk). Vynález bol založený na schopnosti svetla prechádzajúceho cez drobné otvory v disku a zväčšovaciu šošovku preniknúť hlboko do tkaniva a osvetliť fragment bunky v určitej vzdialenosti od povrchu. Keď sa disk rýchlo otáča, fragmenty tvoria jeden obraz. Pohybom štruktúry od alebo bližšie k objektu je možné meniť hĺbku optického rezu študovaného tkaniva.

Až s príchodom videorekordérov v 80. rokoch 20. storočia a počítačov schopných spracovať obrazy začiatkom 90. rokov 20. storočia bolo možné vytvoriť a efektívne používať moderné mikroskopy, ktoré sa používajú dodnes.