Lekársky expert článku
Nové publikácie
Polymerázová reťazová reakcia (PCR) v diagnostike infekčných ochorení
Posledná kontrola: 05.07.2025
Všetok obsah iLive je lekársky kontrolovaný alebo kontrolovaný, aby sa zabezpečila čo najväčšia presnosť faktov.
Máme prísne smernice týkajúce sa získavania zdrojov a len odkaz na seriózne mediálne stránky, akademické výskumné inštitúcie a vždy, keď je to možné, na lekársky partnerské štúdie. Všimnite si, že čísla v zátvorkách ([1], [2] atď.) Sú odkazmi na kliknutia na tieto štúdie.
Ak máte pocit, že niektorý z našich obsahov je nepresný, neaktuálny alebo inak sporný, vyberte ho a stlačte kláves Ctrl + Enter.
PCR je jednou z metód DNA diagnostiky, ktorá umožňuje miliónnásobne zvýšiť počet kópií detegovaného úseku genómu (DNA) baktérií alebo vírusov pomocou enzýmu DNA polymeráza. Testovaný úsek nukleovej kyseliny špecifický pre daný genóm sa mnohonásobne znásobí (amplifikuje), čo umožňuje jeho identifikáciu. Najprv sa molekula DNA baktérií alebo vírusov zahrievaním rozdelí na dva reťazce, potom sa v prítomnosti syntetizovaných DNA primerov (nukleotidová sekvencia je špecifická pre určovaný genóm) viažu na komplementárne úseky DNA a po každom primere sa v prítomnosti termostabilnej DNA polymerázy syntetizuje druhý reťazec nukleovej kyseliny. Získajú sa dve molekuly DNA. Proces sa mnohokrát opakuje. Na diagnostiku stačí jedna molekula DNA, teda jedna baktéria alebo vírusová častica. Zavedenie ďalšieho kroku do reakcie - syntézy DNA na molekule RNA pomocou enzýmu reverzná transkriptáza - umožnilo testovať RNA vírusy, ako je napríklad vírus HCV. PCR je trojstupňový proces, ktorý sa cyklicky opakuje: denaturácia, naviazanie primerov, syntéza DNA (polymerizácia). Syntetizované množstvo DNA sa identifikuje pomocou ELISA alebo elektroforézy.
PCR môže použiť rôzne biologické materiály - krvné sérum alebo plazmu, stery z močovej rúry, biopsiu, pleurálny mok, mozgovomiechový mok atď. PCR sa primárne používa na diagnostiku infekčných ochorení, ako je vírusová hepatitída B, vírusová hepatitída C, vírusová hepatitída D, CMV infekcia, pohlavne prenosné infekcie (kvapavka, chlamýdie, mykoplazma, ureaplazmatické infekcie), tuberkulóza, HIV infekcia atď.
Výhoda PCR pri diagnostike infekčných chorôb oproti iným výskumným metódam je nasledovná:
- infekčný agens možno zistiť v akomkoľvek biologickom prostredí tela vrátane materiálu získaného počas biopsie;
- je možné diagnostikovať infekčné choroby v najskorších štádiách ochorenia;
- je možné kvantitatívne vyhodnotiť výsledky výskumu (koľko vírusov alebo baktérií je obsiahnutých v skúmanom materiáli);
- vysoká citlivosť metódy; napríklad citlivosť PCR na detekciu DNA vírusu hepatitídy B v krvi je 0,001 pg/ml (približne 4 × 10² kópií /ml), zatiaľ čo citlivosť metódy hybridizácie DNA s použitím rozvetvených sond je 2,1 pg/ml (približne 7 × 10³ kópií /ml).
[