Testovanie citlivosti na antibiotiká: príprava, dešifrovanie, koľko sa robí

V súčasnosti sa testovanie citlivosti na antibiotiká stáva čoraz populárnejším. Ľudská mikroflóra je pomerne rozmanitá, reprezentovaná veľkým počtom mikroorganizmov v rôznych biotopoch.

Farmaceutické spoločnosti vyvinuli veľké množstvo antibakteriálnych látok, antibiotík, ktoré pomáhajú udržiavať normálny pomer a počet mikrobiálnych populácií. S nástupom éry antibiotík sa vyliečili mnohé choroby, ktoré boli predtým považované za smrteľné. Mikroorganizmy sa však tiež snažia prežiť a postupne sa prispôsobujú účinku antibakteriálnych liekov. Postupom času si mnohé z nich získali rezistenciu voči mnohým liekom, zafixovali si ju v genotype a začali ju prenášať z generácie na generáciu. Nové mikroorganizmy sú teda spočiatku necitlivé na určité lieky a ich použitie môže byť neúčinné. Farmaceuti vyvíjajú stále viac a viac nových produktov, pridávajú do nich nové účinné látky a menia základný vzorec. Postupne sa však vyvíja aj rezistencia voči nim.

Dôvod zvýšenej rezistencie mikroflóry voči mnohým liekom a dokonca aj ich analógom sa často skrýva v nesprávnom a nekontrolovanom užívaní antibiotík. Lekári predpisujú antibiotiká a ich kombinácie na rôzne bakteriálne ochorenia. Zároveň neexistuje predbežné posúdenie ich účinnosti, nie je zvolené optimálne dávkovanie, čo je veľmi dôležité ako pre liečbu, tak aj pre prevenciu mechanizmov rozvoja ďalšej rezistencie. Mnoho ľudí mylne predpisuje antibakteriálnu liečbu aj pri vírusových ochoreniach, ktorá je neúčinná, pretože antibiotikum nepôsobí proti vírusom.

Terapia sa často predpisuje bez predbežného testovania citlivosti, nevykonáva sa výber účinnej látky a požadovaného dávkovania pre každé konkrétne ochorenie a biotop. Keďže sa antibiotiká predpisujú „naslepo“, často sa vyskytujú prípady, keď neprejavujú žiadnu aktivitu proti mikroorganizmom, ktoré ochorenie spôsobili a ktorých počet je potrebné znížiť. Namiesto toho ovplyvňujú iných zástupcov mikroflóry, čo vedie k dysbakterióze, ktorá je tiež pomerne nebezpečnou patológiou a môže viesť k vážnym následkom. Obzvlášť nebezpečné sú prípady, keď antibiotikum ničí normálnu mikroflóru, ktorá je určená na ochranu tela a udržiavanie jeho normálneho fungovania. Existujú aj prípady, keď sa predpíše príliš veľa alebo príliš málo lieku.

Pacienti sú tiež nezodpovední voči liečbe. Liečba sa často ukončí po tom, čo príznaky ochorenia prestanú trápiť. Zároveň mnohí radšej neabsolvujú celú kúru. To je jeden z faktorov, ktoré prispievajú k rozvoju rezistencie baktérií. Celá kúra je navrhnutá tak, aby úplne zničila patogénnu mikroflóru. Ak kúra nie je dokončená, nie je úplne zničená. Tie mikroorganizmy, ktoré prežijú, podliehajú mutáciám, vyvíjajú mechanizmy, ktoré im poskytujú ochranu pred týmto liekom a prenášajú ju na ďalšie generácie. Nebezpečenstvo spočíva v tom, že rezistencia sa vyvíja nielen vo vzťahu k tomuto konkrétnemu lieku, ale aj k celej skupine liekov.

Preto je dnes jedným z najúčinnejších prostriedkov racionálnej terapie a prevencie rezistencie predbežné stanovenie citlivosti na predpísaný liek a výber jeho optimálneho dávkovania.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]

Indikácie postupu testy citlivosti na antibiotiká

Takáto analýza by sa zvyčajne mala vykonať vo všetkých prípadoch, keď je potrebná antibakteriálna liečba. Na základe základných zákonov antibiotickej liečby možno akékoľvek antibiotikum predpísať až po predbežnom posúdení citlivosti mikroflóry na toto činidlo a po stanovení optimálnej koncentrácie účinnej látky v laboratórnych podmienkach. V praxi sa z rôznych dôvodov a okolností takáto štúdia pred začiatkom liečby nevykonáva a lekár je nútený vybrať liek „náhodne“.

Dnes sa testovanie citlivosti vykonáva iba v prípadoch, keď má lekár vážne pochybnosti o tom, či predpísaný liek bude účinný, v prípadoch dlhodobej absencie účinku lieku a tiež pri opakovanom užívaní toho istého lieku v obmedzenom časovom období. Citlivosť sa často určuje pri liečbe pohlavne prenosných chorôb. Mnoho špecialistov sa obracia na analýzu v prípade vedľajších účinkov, alergických reakcií a keď je potrebné nahradiť jeden liek iným.

Analýza sa tiež často používa na výber liekov na antibakteriálnu liečbu v období rekonvalescencie po operáciách, laparoskopických zákrokoch a odobratí orgánov. Na oddeleniach chirurgie a hnisavej chirurgie je takáto štúdia jednoducho nevyhnutná, pretože sa tu pomerne rýchlo vyvíja rezistencia. Okrem toho sa vyvíjajú superrezistentné „nemocničné“ formy. Mnohé súkromné kliniky pristupujú k predpisovaniu liekov s plnou zodpovednosťou – až po overení citlivosti. V mnohých prípadoch rozpočet štátnych inštitúcií jednoducho neumožňuje vykonávať takéto štúdie pre každého pacienta, ktorý potrebuje antibakteriálnu liečbu.

[ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]

Príprava

Príprava na štúdiu nevyžaduje žiadne špeciálne opatrenia. Je rovnaká ako pri akomkoľvek inom teste. Niekoľko dní pred štúdiou by ste sa mali zdržať pitia alkoholu. Ráno, v deň odberu materiálu, vo väčšine prípadov nemôžete jesť ani piť. Všetko však závisí od typu analýzy. Materiál na štúdiu sa môže líšiť v závislosti od ochorenia.

Pri ochoreniach hrdla a dýchacích ciest sa odoberá výter z hrdla a nosa. Vo venereológii, gynekológii, urológii sa na analýzu odoberajú výtery z genitálií a krv. Pri ochoreniach obličiek sa často vyžaduje vyšetrenie moču. Pri ochoreniach gastrointestinálneho traktu a niektorých infekčných ochoreniach sa vyšetruje stolica a zvratky. Niekedy sa môže vyšetriť materské mlieko, výtok z nosa, očný sekrét, sliny a spútum. V prípade závažných patológií a podozrenia na infekčný proces sa vyšetruje aj mozgovomiechový mok. Spektrum je pomerne široké.

Charakteristiky odberu materiálu sú určené jeho biologickou príslušnosťou. Moč a stolica sa teda odoberajú ráno do čistej nádoby alebo do špeciálnej nádoby na biologický materiál. Materské mlieko sa odoberá pred kŕmením. Stredná časť sa odoberá na vyšetrenie. Ster sa odoberá špeciálnym tampónom, ktorý sa prejde po slizniciach a potom sa spustí do skúmavky s pripraveným médiom. Krv sa odoberá do skúmavky z prsta alebo žily. Pri odbere sterov z močovej rúry alebo vagíny sa odporúča niekoľko dní zdržať sa pohlavného styku.

Pri odbere biologického materiálu na výskum je potrebné v prvom rade zabezpečiť správny odber a sterilitu. Vo väčšine prípadov je to však starosť zdravotníckeho personálu, pacient by sa o to nemal obávať. Najčastejšie sa na takéto štúdie obracajú gynekológovia a urológovia, na druhom mieste - otorinolaryngológovia pri liečbe ochorení nosohltana a hltana, horných dýchacích ciest.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Technika testy citlivosti na antibiotiká

Zozbieraný biologický materiál sa sterilne doručí do laboratória, kde sa vykoná ďalší výskum. Najprv sa vykoná jeho primárny výsev na univerzálne živné médiá. Časť materiálu sa odoberie aj na mikroskopické vyšetrenie. Pripraví sa ster na mikroskopiu a vykoná sa štúdia, pomocou ktorej je možné určiť približný obraz a predpokladať, aké mikroorganizmy sú vo vzorke prítomné. To umožňuje vybrať najoptimálnejšie prostredie pre ďalší výskum a identifikáciu mikroorganizmov. Mikroskopiou je možné pozorovať aj príznaky zápalu, onkologického procesu.

V priebehu niekoľkých dní rastú kolónie mikroorganizmov v Petriho miske. Potom sa odoberie niekoľko kolónií a prenesie sa do selektívnych živných médií, ktoré umožňujú určiť približnú skupinu mikroorganizmov. Inkubujú sa niekoľko dní v termostate a potom sa začína s identifikáciou (určenie typu mikroorganizmu). Identifikácia sa vykonáva pomocou špeciálnych biochemických a genetických testov, identifikátorov. Okrem toho sa môžu vykonať aj imunologické štúdie.

Po izolácii hlavného patogénu sa posúdi jeho citlivosť na antibiotiká. Na to existuje niekoľko metód. Najbežnejšie používanou metódou je sériové riedenie alebo disková difúzna metóda. Metódy sú podrobne opísané v mikrobiologických referenčných knihách, smerniciach a laboratórnych štandardoch.

Podstata diskovej difúznej metódy spočíva v tom, že identifikované mikroorganizmy sa vysejú na živné médium a na vrch sa umiestnia špeciálne disky namočené v antibiotikách. Výsev sa niekoľko dní inkubuje v termostate a potom sa merajú výsledky. Posudzuje sa stupeň inhibície rastu baktérií jednotlivými antibiotikami. Ak je baktéria citlivá na antibiotikum, okolo disku sa vytvorí „lyzačná zóna“, v ktorej sa baktérie nerozmnožujú. Ich rast je pomalý alebo úplne chýba. Priemer zóny inhibície rastu sa používa na určenie stupňa citlivosti mikroorganizmov na antibiotikum a na formulovanie ďalších odporúčaní.

Metóda sériového riedenia je najpresnejšia. Na tento účel sa mikroorganizmy vysiajú na tekuté živné médiá, pridá sa antibiotikum zriedené podľa systému desatinného riedenia. Potom sa skúmavky umiestnia na niekoľko dní do termostatu na inkubáciu. Citlivosť na antibiotiká sa určuje stupňom rastu baktérií v živnom bujóne s pridaním antibiotík. Zaznamenáva sa minimálna koncentrácia, pri ktorej mikroorganizmy stále rastú. Toto je minimálna dávka lieku (je potrebný prepočet z mikrobiologických jednotiek na účinnú látku).

Ide o štandardné mikrobiologické metódy, ktoré tvoria základ akéhokoľvek výskumu. Zahŕňajú manuálne vykonávanie všetkých manipulácií. Dnes je mnoho laboratórií vybavených špeciálnym zariadením, ktoré vykonáva všetky tieto postupy automaticky. Špecialista pracujúci s takýmto zariadením potrebuje iba schopnosť pracovať s týmto zariadením a dodržiavanie bezpečnostných a sterilitačných pravidiel.

Je potrebné vziať do úvahy, že indexy citlivosti v laboratórnych podmienkach a v živých organizmoch sa výrazne líšia. Preto sa osobe predpisuje vyššia dávka, ako sa stanoví počas štúdie. Je to spôsobené tým, že telo nemá také optimálne podmienky pre rast baktérií. V laboratóriu sa vytvárajú „ideálne podmienky“. Časť lieku sa môže neutralizovať pôsobením slín, žalúdočnej šťavy. Časť sa neutralizuje v krvi protilátkami a antitoxínmi produkovanými imunitným systémom.

Test citlivosti na antibiotiká v moči

Najprv sa odoberie biologický materiál. Na to je potrebné odobrať strednú časť ranného moču a doručiť ju do laboratória. Je dôležité dodržiavať sterilitu a neužívať antibiotiká niekoľko dní pred analýzou, inak môžete získať falošne negatívny výsledok. Potom sa vykoná štandardný výsev, ktorého podstatou je izolácia čistej kultúry patogénu a výber antibiotika, ktoré bude mať naň optimálny baktericídny účinok. Stanoví sa požadovaná koncentrácia antibiotika.

Analýza moču sa najčastejšie predpisuje, ak existuje podozrenie na infekčný a zápalový proces v urogenitálnom systéme, s imunodeficienciami a metabolickými poruchami. Moč je zvyčajne sterilná tekutina. Trvanie takejto štúdie je 1-10 dní a je určené rýchlosťou rastu mikroorganizmu.

Kultivačné testy a testy citlivosti na antibiotiká

Štúdia zahŕňa izoláciu mikroorganizmu, ktorý je patogénom, do čistej kultúry. Niekedy môže byť prítomných niekoľko takýchto mikroorganizmov (zmiešaná infekcia). Niektoré mikroorganizmy sú schopné tvoriť biofilmy, ktoré sú akýmsi druhom „mikrobiálnych spoločenstiev“. Miera prežitia biofilmov je oveľa vyššia ako u jednotlivých mikroorganizmov alebo združení. Okrem toho nie všetky antibiotiká sú schopné ovplyvniť biofilm a preniknúť doň.

Na určenie patogénu a jeho izoláciu do čistej kultúry sa vykonáva výsev. Počas štúdie sa vykonáva niekoľko výsevov do rôznych živných médií. Potom sa izoluje čistá kultúra, určí sa jej biologická príslušnosť a stanoví sa citlivosť na antibakteriálne liečivá. Zvolí sa optimálna koncentrácia.

Na štúdiu sa môže použiť akýkoľvek biologický materiál v závislosti od ochorenia a lokalizácie infekčného procesu. Trvanie je určené rýchlosťou rastu mikroorganizmov.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]

Test citlivosti stolice

Stolica sa vyšetruje pri rôznych ochoreniach žalúdka a čriev, pri podozrení na infekčný proces, bakteriálnu intoxikáciu, otravu jedlom. Účelom štúdie je izolovať patogén a vybrať preň optimálne antibakteriálne lieky, ktoré budú mať vysokú aktivitu. Dôležitosť tohto typu štúdie spočíva v tom, že je možné vybrať liek, ktorý bude pôsobiť iba na patogén a nebude mať vplyv na zástupcov normálnej mikroflóry.

Prvou a veľmi dôležitou fázou je zber stolice. Mala by sa zozbierať do špeciálnej sterilnej nádoby ráno. Nemala by sa skladovať dlhšie ako 1-2 hodiny. Ženy s menštruačným krvácaním by mali analýzu odložiť na koniec, pretože presnosť výsledkov sa zmení. Materiál sa doručí do laboratória na testovanie. Analýza sa vykonáva štandardnými mikrobiologickými technikami výsevu a izolácie čistej kultúry. Vykoná sa aj antibiogram. Na základe záveru sa vypracujú odporúčania a určí sa ďalšia schéma štúdie.

[ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Analýza dysbakteriózy s citlivosťou

Materiálom na štúdiu je stolica odobratá bezprostredne po defekácii. Normálna mikroflóra gastrointestinálneho traktu pozostáva zo zástupcov normálnej flóry a niekoľkých zástupcov patogénnej flóry. Ich druhové zloženie, množstvo a pomer sú prísne definované a udržiavajú sa v rámci povolenej normy. Ak je tento pomer narušený, vyvíja sa dysbakterióza. Môže sa prejavovať rôznymi spôsobmi. Infekčné choroby sa môžu vyvinúť, ak sa množstvo patogénnej mikroflóry prudko zvýši. Ak sa množstvo akéhokoľvek mikroorganizmu prudko zníži, voľný priestor obsadia iní zástupcovia, ktorí nie sú typickí pre gastrointestinálny trakt alebo sú patogénni. Voľný priestor často obsadí huba, potom sa vyvinú rôzne plesňové infekcie a kandidóza.

Na určenie kvantitatívneho a kvalitatívneho zloženia črevnej mikroflóry sa vykonáva analýza stolice na dysbakteriózu. Všetkých zástupcov žijúcich v čreve zvyčajne delíme do troch skupín: patogénnych, oportúnnych a nepatogénnych. Analýza sa teda skladá z troch častí. Každá skupina mikroorganizmov má svoje vlastné potreby, pokiaľ ide o zdroj potravy a energiu. Každá skupina vyžaduje samostatné živné médiá a selektívne prísady.

Najprv sa vykoná mikroskopia a primárny výsev. Po vysiatí sa vyberú najväčšie kolónie, ktoré sa morfologickými znakmi podobajú zástupcom každej skupiny. Prenesú sa do selektívnych médií. Po vypestovaní mikroorganizmov sa identifikujú a ihneď sa testujú na citlivosť na antibiotiká. Používajú sa štandardné mikrobiologické metódy.

Štúdium skupiny patogénnych mikroorganizmov okrem štandardných štúdií zahŕňa stanovenie baktérií týfusu, paratýfusu a úplavice. Taktiež sa zisťuje, či je osoba nositeľom týchto mikroorganizmov. Komplexné vyšetrenie dysbakteriózy zahŕňa aj štúdium zástupcov skupiny bifidobaktérií a laktobacilov. Štúdia trvá približne týždeň a závisí od rýchlosti rastu mikroorganizmov.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ]

Testovanie citlivosti na bakteriofágy

V prípade črevnej infekcie sa bakteriofágy často používajú na liečbu namiesto antibiotík. Bakteriofágy sú bakteriálne vírusy, ktoré sú citlivé iba na ne. Nájdu baktériu, s ktorou sa dopĺňajú, preniknú do nej a postupne ničia bakteriálnu bunku. V dôsledku toho sa infekčný proces zastaví. Nie všetky baktérie sú však citlivé na bakteriofágy. Aby sa overilo, či daný bakteriofág prejaví aktivitu voči zástupcom mikroflóry, je potrebné vykonať analýzu.

Materiálom na štúdiu sú výkaly. Analýza musí byť doručená do laboratória do hodiny, inak ju nebude možné vykonať. Analýzu je potrebné vykonať v niekoľkých opakovaniach. Počiatočná metóda je podobná metóde na stanovenie citlivosti na antibiotiká. Najprv sa vykoná predbežná mikroskopia vzorky, potom primárny výsev na univerzálne živné médiá. Potom sa čistá kultúra izoluje na selektívne živné médiá.

Hlavná práca sa vykonáva s čistou kultúrou. Ošetrujú sa rôznymi typmi bakteriofágov. Ak sa kolónia rozpustí (lýzuje), naznačuje to vysokú aktivitu bakteriofága. Ak je lýza čiastočná, bakteriofág funguje mierne. Pri absencii lýzy môžeme hovoriť o rezistencii voči bakteriofágu.

Výhodou fágovej terapie je, že bakteriofágy neovplyvňujú ľudské telo a nespôsobujú vedľajšie účinky. Viažu sa na určité typy baktérií a lýzujú ich. Nevýhodou je, že sú veľmi špecifické a majú selektívny účinok a nie vždy sa viazajú na baktérie.

[ 30 ], [ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ], [ 36 ], [ 37 ], [ 38 ]

Analýza spúta na citlivosť na antibiotiká

Analýza je štúdiom výtoku z dolných dýchacích ciest. Cieľom je určiť typ mikroorganizmov, ktoré pôsobia ako pôvodca ochorenia. Vykonáva sa aj antibiogram. V tomto prípade sa určí citlivosť patogénu na antibiotiká a zvolí sa optimálna koncentrácia. Používa sa pri ochoreniach dýchacích ciest.

Vyšetrenie spúta a iného obsahu pľúc a priedušiek je nevyhnutné pre výber liečebného režimu a pre rozlíšenie rôznych diagnóz. Používa sa na potvrdenie alebo vyvrátenie prítomnosti tuberkulózy.

Najprv je potrebné získať biologický materiál. Môže sa získať kašľom, vykašliavaním alebo odberom z priedušnice počas bronchoskopie. Existujú špeciálne aerosóly, ktoré podporujú vykašliavanie. Pred odberom spúta si treba ústa vypláchnuť vodou, čo zníži stupeň bakteriálnej kontaminácie ústnej dutiny. Najprv sa odporúča 3-krát zhlboka sa nadýchnuť a vyvolať produktívny kašeľ. Spúto sa môže odobrať aj aspiráciou z priedušnice. V tomto prípade sa do priedušnice zavedie špeciálny katéter. Počas bronchoskopie sa do prieduškovej dutiny zavedie bronchoskop. V tomto prípade sa sliznica namastí anestetikom.

Materiál sa potom odošle do laboratória na testovanie. Vykoná sa štandardný výsev a mikroskopia. Následne sa izoluje čistá kultúra a s ňou sa vykonávajú ďalšie manipulácie. Vykoná sa antibiogram, ktorý umožňuje identifikovať spektrum citlivosti baktérií a zvoliť optimálne dávkovanie.

Ak existuje podozrenie na tuberkulózu, ranné spúta sa vyšetrujú tri dni. Pri testovaní na tuberkulózu bude výsledok pripravený do 3-4 týždňov. Keďže Mycobacterium tuberculosis, ktorá je pôvodcom ochorenia, rastie veľmi pomaly.

Normálne by sa mali zistiť zástupcovia normálnej mikroflóry dýchacích ciest. Je tiež potrebné vziať do úvahy, že pri zníženej imunite sa ukazovatele normálnej mikroflóry môžu líšiť.

Analýza spermií na citlivosť na antibiotiká

Ide o bakteriologické vyšetrenie ejakulátu spermií s následným výberom citlivých antibiotík a ich koncentrácií. Najčastejšie sa vykonáva pri liečbe neplodnosti a iných ochorení mužského reprodukčného systému. V prípade, že ochorenie sprevádza infekčný proces. Hlavnou príčinou mužskej neplodnosti je vo väčšine prípadov infekcia. Zvyčajne sa najprv vykoná spermiogram. Na základe výsledkov sa stanoví schopnosť spermií oplodniť. Ak sa v tejto analýze zistí veľký počet leukocytov, môžeme hovoriť o zápalovom procese. V tomto prípade sa zvyčajne okamžite predpíše mikrobiologická analýza, pretože zápal je takmer vždy sprevádzaný infekciou. Na základe získaných výsledkov sa zvolí vhodná terapia. Vyšetrenie zvyčajne predpisuje andrológ.

Prostatitída a pohlavné choroby sú tiež dôvodmi na vykonanie analýzy. Predpisuje sa aj v prípade, že sa u partnera zistí pohlavná choroba.

Základom správnej analýzy je v prvom rade správny odber biologického materiálu. Materiál sa odoberá do špeciálnych nádob so širokým hrdlom. Skladovacia teplota by mala zodpovedať teplote ľudského tela. V tomto prípade sa materiál môže skladovať maximálne hodinu. V zmrazenej forme sa môže skladovať maximálne jeden deň. Počas užívania antibiotík nie je vhodné odoberať kultivačný materiál, pretože to mení klinický obraz. Kultivačný materiál sa zvyčajne odoberá pred začatím antibiotickej liečby. Alebo sa lieky prestanú užívať 2-3 dni pred analýzou.

Potom sa vysie na živné médium. Inkubuje sa v termostate 1-2 dni. Potom sa izoluje čistá kultúra, vykoná sa identifikácia, stanoví sa citlivosť, ako aj typ a rýchlosť rastu každej kolónie. Citlivosť na antibiotiká sa stanoví, ak sa zistia patogénne mikroorganizmy. Analýza trvá v priemere 5-7 dní.

[ 39 ], [ 40 ], [ 41 ], [ 42 ], [ 43 ]

Test citlivosti na lepok

Existuje mnoho testov, ktoré možno použiť na určenie imunologickej citlivosti na rôzne látky alebo patogény. Predtým bola hlavnou metódou vykonávanie testov založených na aglutinačnej reakcii protilátok a antigénov. Dnes sa tieto testy používajú čoraz menej, pretože ich citlivosť je oveľa nižšia ako u mnohých moderných metód, ako sú napríklad testy na lepok. Najčastejšie sa v praxi uchyľujú k testu na lepok zo slín a k analýze stolice.

Test citlivosti na glutén sa používa na diagnostiku rôznych črevných porúch. Je založený na reakcii imunitného systému. Ak sa do stolice pridá glutén, reakcia sa objaví alebo chýba. Toto sa považuje za falošne pozitívny alebo falošne negatívny výsledok. Pozitívny výsledok naznačuje predispozíciu ku kolitíde, vysokú pravdepodobnosť jej vzniku. Potvrdzuje tiež celiakiu.

Je tiež možné vykonať test na lepok s použitím slín ako biologického materiálu. Je možné merať množstvo protilátok proti gliadínu. Pozitívny výsledok naznačuje citlivosť na lepok. To môže naznačovať vysokú pravdepodobnosť cukrovky. Ak sú oba testy pozitívne, možno potvrdiť cukrovku alebo celiakiu.

[ 44 ], [ 45 ]

Test citlivosti chlamýdií na antibiotiká

Analýza sa vykonáva pri liečbe infekčných a zápalových ochorení urogenitálneho traktu, ak existuje podozrenie na chlamýdie. Materiálom na štúdiu je šrot z vaginálnej sliznice - u žien, ster z močovej trubice - u mužov. Odber sa vykonáva v miestnosti na vyšetrenie pomocou jednorazových nástrojov. Je dôležité dodržiavať sterilitu. Pred odberom materiálu by ste sa mali zdržať intímneho styku 1-2 dni pred začiatkom štúdie. Ak žena menštruuje, materiál sa odoberá 3 dni po jej úplnom ukončení.

Materiál sa doručí do laboratória. Úplná analýza zahŕňa predbežnú mikroskopiu náteru. To umožňuje vizuálne určiť mikroflóru podľa morfologických znakov a správne vybrať živné médiá. Obsah hlienu, hnisu a epitelových častíc môže priamo alebo nepriamo naznačovať vývoj zápalového procesu alebo malígnu degeneráciu buniek.

Potom sa vykoná primárny výsev. Kultúra sa inkubuje niekoľko dní v termostate a identifikácia sa vykonáva na základe kultivačných charakteristík. Následne sa kultúra prenesie na selektívne živné médiá určené na kultiváciu chlamýdií. Výsledné kolónie sa identifikujú pomocou biochemických testov. Následne sa štandardnými metódami stanoví citlivosť na antibiotiká. Vyberie sa najcitlivejšie antibiotikum a jeho koncentrácia. Na kultiváciu chlamýdií sú potrebné špeciálne médiá vyvinuté špeciálne pre tento typ mikroorganizmu, ktoré obsahujú všetky potrebné látky a rastové faktory.

Štúdiu je možné vykonať aj biologickou metódou. Na tento účel sa potkany infikujú patogénom. V niektorých laboratóriách sa namiesto potkanov používa špeciálne pestovaná tkanivová kultúra. Je to spôsobené tým, že chlamýdie sú intracelulárne parazity a na ich kultiváciu sú potrebné špeciálne podmienky. Potom sa mikroorganizmy stanovia metódou PCR. Na stanovenie citlivosti sa transplantujú na selektívne živné médium pre chlamýdie a po niekoľkých dňoch sa zaznamenajú výsledky. Rezistencia alebo citlivosť sa posudzuje podľa potlačenia infekčného procesu v bunkách.

[ 46 ], [ 47 ], [ 48 ], [ 49 ], [ 50 ], [ 51 ], [ 52 ], [ 53 ]

Ako dlho trvá test citlivosti na antibiotiká?

V priemere sa analýza vykoná do 5-7 dní. Niektoré analýzy trvajú dlhšie. Napríklad pri diagnostikovaní tuberkulózy musíte na výsledky čakať 3 týždne až mesiac. Všetko závisí od rýchlosti rastu mikroorganizmov. Laboratórni pracovníci sa často musia zaoberať prípadmi, keď pacienti žiadajú o rýchlejšie vykonanie analýzy. A dokonca ponúkajú „príplatok“ za urgentnosť. Tu však treba pochopiť, že v tomto prípade nič nezávisí od konania laboratórneho asistenta. Záleží len na tom, ako rýchlo mikroorganizmus rastie. Každý typ má svoju vlastnú, presne definovanú rýchlosť rastu.

Normálny výkon

Neexistujú žiadne absolútne univerzálne normatívne hodnoty pre všetky analýzy. Po prvé, tieto hodnoty sa môžu líšiť pre každý biotop. Po druhé, sú individuálne pre každý mikroorganizmus. To znamená, že normatívne hodnoty pre ten istý mikroorganizmus, napríklad pre hrdlo a črevá, sú odlišné. Ak teda v hrdle prevláda stafylokok ako zástupca normálnej mikroflóry, potom v črevách prevládajú E. coli, bifidobaktérie a laktobaktérie. Hodnoty pre ten istý mikroorganizmus v rôznych biotopoch sa tiež môžu výrazne líšiť. Napríklad Candida môže byť normálne prítomná v určitom množstve v urogenitálnej mikroflóre. V ústnej dutine sa normálne nevyskytuje. Prítomnosť Candidy v ústnej dutine môže naznačovať ich umelé zavlečenie z ich prirodzeného prostredia.

Moč, krv, mozgovomiechový mok sú biologické prostredia, ktoré by za normálnych okolností mali byť sterilné, teda nemali by obsahovať žiadnu mikroflóru. Prítomnosť mikroflóry v týchto tekutinách naznačuje silný zápalový, infekčný proces a tiež naznačuje riziko vzniku bakteriémie a sepsy.

Vo všeobecnosti existuje približná klasifikácia. Jednotkou merania v mikrobiológii je CFU/ml, teda počet jednotiek tvoriacich kolónie v 1 mililitri biologickej tekutiny. Stupeň kontaminácie je určený počtom CFU a pohybuje sa v širokom rozmedzí od 101 ^do 109. ^V súlade s tým je ¹⁰¹ minimálny počet mikroorganizmov, ¹⁰⁹ je závažný stupeň infekcie. Zároveň sa rozsah do 103 ^považuje za normálny, všetky ukazovatele nad týmto číslom naznačujú patologickú reprodukciu baktérií.

Pokiaľ ide o citlivosť na antibiotiká, všetky mikroorganizmy sa delia na rezistentné, stredne citlivé a citlivé. Tento výsledok sa často vyjadruje ako kvalitatívna charakteristika označujúca MID - minimálnu inhibičnú dávku antibiotika, ktorá stále inhibuje rast mikroorganizmu. Pre každú osobu, ako aj pre každý mikroorganizmus, sú tieto ukazovatele prísne individuálne.

[ 54 ], [ 55 ], [ 56 ], [ 57 ]

Zariadenie na analýzu

Pri vykonávaní bakteriologických štúdií, najmä pri stanovovaní citlivosti na antibiotiká, jedno zariadenie nebude stačiť. Je potrebné kompletné a komplexné vybavenie bakteriologického laboratória. Je potrebné starostlivo naplánovať a vybrať vybavenie, ktoré bude zodpovedať každej fáze výskumu. Vo fáze zberu biologického materiálu sú potrebné sterilné nástroje, škatule, krabice, kontajnery, skladovacie komory a transportné zariadenia na prepravu materiálu do laboratória.

V laboratóriu budete v prvom rade potrebovať kvalitný mikroskop na mikroskopiu náteru. Dnes existuje veľké množstvo mikroskopov s rôznymi vlastnosťami - od tradičných svetelných až po fázovo-kontrastné a atómové silové mikroskopy. Moderné vybavenie umožňuje skenovať obraz v trojrozmernom priestore a skúmať ho pri vysokom zväčšení s vysokou presnosťou.

Vo fáze očkovania a inkubácie mikroorganizmov môžu byť potrebné autoklávy, suchoteplotné skrine, exsikátory, parné kúpele a odstredivka. Vyžaduje sa termostat, v ktorom dochádza k hlavnej inkubácii biologického materiálu.

V štádiu identifikácie mikroorganizmov a vykonania antibiogramu môžu byť na rôzne výpočty a hodnotenie biochemických vlastností kultúr potrebné mikromanipulátory, hmotnostné spektrometre, spektrofotometre a kolorimetre.

Okrem toho môžu byť moderné laboratóriá vybavené high-tech zariadeniami, ktoré vykonávajú všetky vyššie uvedené hlavné fázy výskumu až po výpočet výsledkov v automatickom režime. Medzi takéto zariadenia patrí napríklad komplexné zariadenie bakteriologického laboratória založené na hmotnostnom spektrometri s časom letu. Táto rada zariadení umožňuje rozdeliť celé územie laboratória do troch zón. Prvá zóna je špinavá, kde sa prijímajú a registrujú testy. Druhá zóna je pracovná zóna, kde sa skutočne vykonáva hlavný mikrobiologický výskum. A tretia zóna je sterilizačná a autoklávovaná, kde sa vykonáva príprava a likvidácia pracovného materiálu.

Modely umožňujú inkubáciu v širokom rozsahu teplôt a podmienok. Obsahujú vstavaný analyzátor krvi a iných biologických vzoriek, ktorý poskytuje výsledky s vysokou presnosťou a spoľahlivosťou. Súprava obsahuje elektronické váhy, bidestilátory, centrifúgy, autoklávy a sterilizačné skrinky, automatický varič média, vodný kúpeľ so vstavaným miešadlom, pH metre, teplomery a mikroskopy.

Používa sa aj mikrobiologický analyzátor, do ktorého sa vkladajú testované vzorky, živné médiá a sady testov na určenie citlivosti. Prístroj vykoná potrebné štúdie a vydá hotový záver.

Zvyšovanie a zníženie hodnôt

Analýzu dokáže rozlúštiť iba lekár. Pacienti však po obdržaní výsledkov často panikária, keď si všimnú veľké množstvo nezrozumiteľných symbolov a čísel. Aby sa nestratili, je vhodné mať aspoň všeobecnú predstavu o tom, ako rozlúštiť analýzu citlivosti na antibiotiká. Zvyčajne prvá položka vo výsledkoch označuje názov mikroorganizmu, ktorý je pôvodcom ochorenia. Názov je uvedený v latinčine. Môže tiež označovať zástupcu normálnej mikroflóry, ktorá v tele prevláda, takže nie je potrebné panikáriť. Druhá položka označuje stupeň očkovania, teda počet mikroorganizmov. Zvyčajne sa toto číslo pohybuje od 101 ^do 109. ^Tretia položka označuje formu patogenity a štvrtá názvy antibakteriálnych liekov, na ktoré je tento mikroorganizmus citlivý. V blízkosti je uvedená minimálna inhibičná koncentrácia, pri ktorej je rast mikroorganizmu potlačený.

[ 58 ], [ 59 ], [ 60 ], [ 61 ], [ 62 ], [ 63 ]