Vitamín A v krvi

Referenčné hodnoty (norma) pre koncentráciu vitamínu A (retinolu) v krvnom sére: u detí vo veku 1-6 rokov - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 rokov - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 rokov - 0,91-2,51 μmol/l; u dospelých - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamín A je vitamín rozpustný v tukoch a existuje v dvoch formách: samotný vitamín A alebo retinol (nachádza sa iba v živočíšnych produktoch) a provitamín A, známy ako karotén (získavaný zo živočíšnych a rastlinných produktov), ktorý sa môže premeniť na retinol v stenách tráviaceho traktu. Približne 50 – 90 % retinolu z potravy sa vstrebáva v tenkom čreve a transportuje sa v komplexe viazanom na chylomikróny do pečene, kde sa ukladá ako palmitát retinolu. V prípade potreby sa uvoľňuje do krvného obehu ako retinol v komplexe s proteínom viažucim vitamín A. V krvnom sére sa komplex proteínu viažuceho vitamín A + retinol viaže na transtyretín. Z krvného séra je retinol prijímaný cieľovými bunkami, ako sú fotoreceptory sietnice a epitelu.

Keď telo prijíma vitamín A v množstvách prevyšujúcich požiadavky (180 – 430 mcg retinolu denne v závislosti od veku, pohlavia a fyziologického stavu), jeho prebytok sa ukladá v pečeni a tvorí zásobu tohto vitamínu. Keď sa príjem retinolu s potravou zníži, jeho zásoby z pečene sa uvoľňujú do krvného obehu, čím sa koncentrácia retinolu v krvnom sére udržiava na normálnej úrovni (nad 0,7 μmol/l). Iné biologicky aktívne formy vitamínu A (retinál a kyselina retinová) sú v krvi prítomné vo veľmi nízkych koncentráciách (pod 0,35 μmol/l); estery retinolu tvoria približne 5 % celkového vitamínu A (0,1 – 0,17 μmol/l).

Vitamín A hrá dôležitú úlohu v oxidačno-redukčných procesoch. Retinol podporuje tvorbu glykogénu v pečeni a svaloch, pomáha zvyšovať obsah cholesterolu v krvi a podieľa sa na syntéze steroidných a pohlavných hormónov. Je nevyhnutný pre rast a formovanie kostrového systému, resyntézu rodopsínu a tiež podporuje normálnu funkciu slizníc a kožného epitelu, čím zabraňuje jej metaplázii, hyperkeratóze a nadmernému odlupovaniu. Vitamín A pomáha posilňovať vlasy, zuby a ďasná. V posledných rokoch sa preukázala rozmanitá úloha vitamínu A v prevencii rakoviny a regulácii imunity (je nevyhnutný pre dokončenie fagocytózy, zvyšuje syntézu Ig, stimuluje tvorbu T-zabíjačov, stimuluje T-pomocníkov typu II atď.). Vitamín A je aktívny antioxidant, ktorý pôsobí hlavne v prítomnosti vitamínu E; chráni vitamín C pred oxidáciou. Nedostatok vitamínu A sa považuje za rizikový faktor vzniku zhubných nádorov. Experimentálne štúdie ukázali, že zvýšenie obsahu vitamínu A v strave zvyšuje strednú dĺžku života o 17,5 %. Zinok je nevyhnutný kofaktor v metabolizme vitamínu A (nevyhnutný pre syntézu proteínu viažuceho vitamín A).

Priemerná denná potreba retinolu pre dospelých (20 – 50 rokov) je 1,2 mg (4 000 IU, 1 IU zodpovedá 0,3 mcg retinolu), pre tehotné ženy – 1,5 mg (5 000 IU), pre dojčiace ženy – 1,8 mg (6 000 IU), pre osoby nad 60 rokov – 2,5 mg (10 000 IU). Najmenej tretina dennej potreby retinolu by mala byť do tela dodávaná v hotovej forme; zvyšok je možné pokryť konzumáciou karotenoidov, z ktorých sa retinol v tele tvorí. Treba vziať do úvahy, že približne 30 % retinolu v potravinách sa počas tepelného spracovania ničí. Aktivita retinolu je 2-krát vyššia ako aktivita karoténu a navyše sa v čreve vstrebáva iba 30 – 40 % karoténu. Preto sa pri hodnotení stravy predpokladá, že 1 mg retinolu zodpovedá približne 6 mg karotenoidov.

Stanovenie retinolu (vitamínu A) a karotenoidov v krvnom sére podľa Besseyho metódy v modifikácii L. A. Anisimovej

Princíp metódy

Stanovenie vitamínu A a karotenoidov je založené na ich hydrolýze v alkalickom alkoholovom roztoku, po ktorej nasleduje extrakcia zmesou organických rozpúšťadiel.

Činidlá

• 11 M roztok hydroxidu draselného (KOH).
• 96 % etylalkohol.
• 1 M roztok hydroxidu draselného (KOH) v 96 % etylalkohole: 1 objem 11 M roztoku KOH sa zmieša s 10 objemami 96 % etylalkoholu. Činidlo sa pripraví v deň štúdie. Ak sa počas miešania objaví sfarbenie, alkohol sa má pred použitím vyčistiť destiláciou.
• Xylén, chemicky čistý
• Oktán, chemicky čistý
• Zmes xylénu a oktánu: pripravená zmiešaním rovnakých objemov xylénu a oktánu.

Štúdie sa vykonávajú pomocou spektrofotometra.

Proces stanovenia vitamínu A

Krv odobratá z prsta (približne 1 ml) sa umiestni do centrifugačnej skúmavky a na 20 – 30 minút sa umiestni do skleneného pohára s teplou vodou (teplota 40 – 45 °C). Na oddelenie séra sa krvná zrazenina opatrne oddelí od okraja stien skúmavky tenkou sklenenou tyčinkou a centrifuguje sa pri 3 000 otáčkach za minútu počas 10 minút.

Odoberie sa 0,12 ml séra a prenesie sa do aglutinačnej skúmavky, kam sa potom pridá 0,12 ml 1 M roztoku hydroxidu draselného v alkohole. Obsah sa dôkladne pretrepe.

Skúmavky so vzorkami sa umiestnia na 20 minút do vodného kúpeľa pri teplote 60 °C, aby sa vykonala hydrolýza.

Vzorky sa ochladia a pridá sa k nim 0,12 ml zmesi xylén-oktánu a dôkladne sa pretrepávajú 10 – 15 sekúnd. Opäť sa ochladia a centrifugujú.

Vrchná vrstva obsahujúca vitamín A a karotenoidy sa opatrne odstráni pomocou Pasteurovej pipety s gumenou balónikom a prenesie sa do mikrokyviet.

Vzorky sa spektrofotometricky analyzujú pri vlnovej dĺžke 328 nm na stanovenie vitamínu A a pri vlnovej dĺžke 460 nm na stanovenie karotenoidov.

Po spektrofotometrii sa vzorky vystavia ultrafialovému žiareniu, aby sa zničil vitamín A. Na tento účel sa vo vzdialenosti 15 – 20 cm od mikrokyviet inštaluje kremenná (baktericídna) lampa tak, aby bola časť kyvety naplnená kvapalinou vystavená žiareniu; doba ožarovania je 45 – 60 minút.

Vzorky sa opätovne spektrofotometricky analyzujú pri vlnovej dĺžke 328 nm. Obsah vitamínu A sa určí rozdielom v hodnotách extinkcie (optická hustota) s prihliadnutím na koeficient (faktor) 637 vypočítaný Besseyom pre vitamín A.

Výpočet sa vykonáva podľa vzorca:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Kde X je obsah vitamínu A, μg/dl; 637 je koeficient vypočítaný podľa Besseyho na stanovenie vitamínu A; E328(1) je optická hustota roztoku pred ožiarením; E328(2) je optická hustota roztoku po ožiarení.

Koeficient pre prevod koncentrácie vitamínu A z µg/dL na µmol/l je 0,035.

Obsah karotenoidov sa vypočíta pomocou vzorca:

X = 480-E480,

Kde X je obsah karotenoidov, μg/dl; 480 je koeficient vypočítaný podľa Besseyho na stanovenie karotenoidov; E480 je optická hustota testovaného roztoku.

Poznámka

Podľa Besseyho sa pri výskume môže použiť väčší alebo menší objem séra, ale jeho pomer k objemu alkoholového roztoku musí byť konštantný pri akejkoľvek zmene objemu (množstva) zmesi xylén-oktán.

Normálny obsah vitamínu A v krvnom sére je: u novorodencov a dojčiat - 160-270 μg/l; u dospelých - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Obsah karotenoidov v krvnom sére dospelých je 800-2300 μg/l.