Vitamín A v krvi

Referenčné hodnoty (norma) koncentrácie vitamínu A (retinolu) v krvnom sére: u detí 1-6 rokov - 0,7-1,5 μmol / l, 7-12 rokov - 0,91-1,71 μmol / l, 13 -19 rokov - 0,91-2,51 μmol / l; u dospelých je 1,05-2,09 μmol / l.

Vitamín A sa týka rozpustných v tukoch a existuje v dvoch formách - skutočný vitamín A alebo retinol (nájdených iba v živočíšnych produktov) a provitamín A, známy ako karotén (pripravený z živočíšneho alebo rastlinného pôvodu), ktoré môžu byť prevedené na retinol v stenách zažívacieho traktu. Približne 50 až 90% retinolu prichádzajúce potraviny je absorbovaná v tenkom čreve a prepravované v chylomikrónoch spojených s komplexom do pečene, kde je uložený vo forme retinolpalmitát. V prípade potreby sa uvoľňuje do krvného obehu vo forme retinolu, ktorý je v kombinácii s proteínom viažucim vitamín A. V sére sa vitamín A-viažuci proteín + retinolový komplex viaže na transtyretín. Zo séra je retinol zachytený cieľovými bunkami, ako sú retinálne fotoreceptory a epitel.

Keď telo vitamínu A v množstve presahujúcom požiadavky (180-430 mikrogramov retinol za deň v závislosti od veku, pohlavia a fyziologického stavu), jeho prebytok v pečeni sú uložené tvoriaci depot tohto vitamínu. Pri zníženom príjme retinolu z potravy sa jeho zásoby pečene uvoľňujú do krvného obehu, pričom udržiava koncentráciu sérového retinolu na normálnej úrovni (nad 0,7 μmol / l). Ďalšie biologicky aktívne formy vitamínu A (kyselina sietnicová a kyselina retinová) sú prítomné v krvi vo veľmi nízkych koncentráciách (pod 0,35 μmol / l); na estery retinolu predstavuje približne 5% celkového obsahu vitamínu A (0,1-0,1 μmol / l).

Vitamín A má dôležitú úlohu v procesoch oxidácie a redukcie. Retinol podporuje tvorbu glykogénu v pečeni a svaloch, podporuje zvýšenie hladiny cholesterolu v krvi, zúčastňuje sa syntézy steroidov a pohlavných hormónov. To je nutné pre rast a tvorbu kostí skeletu resyntézy rhodopsínu, a tiež prispieva k normálnemu fungovaniu sliznice a epitelu krytu kože, bráni jeho metaplázia, hyperkeratóza a nadmerné odlupovanie. Vitamín A pomáha posilňovať vlasy, zuby a ďasná. V posledných rokoch sa ukazuje, pestrý rola vitamínu A v prevencii rakoviny a reguláciu imunity (nevyhnutné na ukončenie fagocytózy, zvyšujú syntézu Ig, stimuluje produkciu zabíječských T lymfocytov, stimuluje typ T-pomocných II a kol.). Vitamín A - aktívny antioxidant, ktorý pôsobí hlavne v prítomnosti vitamínu E; chráni vitamín C pred oxidáciou. Nedostatok vitamínu A sa považuje za rizikový faktor u malígnych novotvarov. V experimentálnych štúdiách sa ukázalo, že zvýšenie obsahu vitamínu A v strave zvyšuje strednú dĺžku života o 17,5%. Zinok je nevyhnutným kofaktorom metabolizmu vitamínu A (nevyhnutný pre syntézu proteínu viažuceho vitamín A).

Priemerná denná dávka pre dospelých retinolu (20-50 rokov) bolo 1,2 mg (4,000 IU, 1 IU sa rovná 0,3 mikrogramov retinolu), pre tehotné ženy - 1,5 mg (5000 IU) pre dojčenie - 1, 8 mg (6000 IU), pre ľudí starších ako 60 rokov - 2,5 mg (10 000 IU). Aspoň tretina denných potrieb retinolu sa má dodávať tela v hotovej forme; zvyšok sa môže absorbovať použitím karotenoidov, z ktorých sa v tele formujú retinol. Treba mať na pamäti, že približne 30% retinolu v potravinách je zničených tepelným ošetrením. Aktivita retinolu je dvojnásobne vyššia ako karotén, navyše je to len 30-40% absorbovaných do čreva. Preto pri posudzovaní príjmu potravy sa predpokladá, že 1 mg retinolu približne zodpovedá 6 mg karotenoidov.

Stanovenie retinolu (vitamínu A) a karotenoidov v sére podľa Besseyho v modifikácii LA Anisimova

Princíp metódy

Stanovenie vitamínu A a karotenoidov je založené na ich hydrolýze v roztoku alkalického alkoholu, po ktorom nasleduje extrakcia zmesou organických rozpúšťadiel.

činidlá

• 11 M roztok hydroxidu draselného (KOH).
• 96% etylalkoholu.
• 1 M roztok hydroxidu draselného (KOH) v 96% etylalkohole: 1 objem roztoku 11 mol / l KOH sa zmieša s 10 objemami 96% etylalkoholu. Činidlo sa pripravuje v deň štúdie. Ak dôjde k zafarbeniu počas miešania, alkohol sa musí pred použitím vyčistiť destiláciou.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Zmes xylenu a oktánu: pripravená zmiešaním rovnakých objemov xylénu a oktánu.

Vyšetrenia sa vykonávajú na spektrofotometri.

Priebeh stanovenia vitamínu A

Odobratá krv z prsta (asi 1 ml) sa pridá k štítku centrifúgy a umiestni sa do skleneného pohára s teplou vodou (teplota 40 až 45 ° C) počas 20 až 30 minút. Na oddelenie séra je krvná zrazenina starostlivo navinutá okolo okraja trubice tenkou sklenenou tyčinkou a centrifugovaná pri 3000 ot / min počas 10 minút.

Vyberte 0,12 ml séra a preneste ho do aglutinačnej skúmavky a potom pridajte 0,12 ml 1 M roztoku alkoholu s hydroxidom draselným. Obsah je dôkladne pretrepaný.

Skúmavky so sondami sa umiestnia do vodného kúpeľa 20 minút pri teplote 60 ° C na hydrolýzu.

Vzorky sa ochladia a pridá sa k nim 0,12 ml zmesi xylén-oktánu, ktorá sa intenzívne pretrepáva počas 10 až 15 sekúnd. Opäť ochlaďte a odstreďte.

Opatrne odstráňte hornú vrstvu obsahujúcu vitamín A a karotenoidy pipetou Pasteur s gumovou plechovkou a preneste ju na mikroukety.

Vzorky sú spektrofotometrické pri vlnovej dĺžke 328 nm - na stanovenie obsahu vitamínu A a pri vlnovej dĺžke 460 nm - na stanovenie karotenoidov.

Po spektrum je študovaný vzorka podrobený ultrafialovému žiareniu pre deštrukciu vitamínu A. Za týmto účelom je vo vzdialenosti 15-20 cm od kremenné microcuvettes nastavenej (baktericídne) svetlometu tak, že ožarovanie vystavená časť kyvety, naplnené kvapalinou; doba ožiarenia je 45-60 minút.

Vzorky sú opakovane spektrofotometrické pri vlnovej dĺžke 328 nm. Obsah vitamínu A sa určuje z rozdielu v hodnotách extinkcie (optická hustota), pričom sa zohľadňuje koeficient (faktor) 637 vypočítaný Besseyom pre vitamín A.

Výpočet sa vykonáva podľa vzorca:

X = 637 × (E328 (1) - E328 (2)),

Kde X je obsah vitamínu A, μg / dl; 637 je koeficient vypočítaný spoločnosťou Bessey na stanovenie obsahu vitamínu A; E328 (1) - optická hustota roztoku pred ožiarením; E328 (2) je optická hustota roztoku po ožiarení.

Koeficient pre prenos koncentrácie vitamínu A z μg / dl v μmol / l je 0,035.

Obsah karotenoidov sa vypočíta podľa vzorca:

X = 480-E480,

Kde X je obsah karotenoidov, μg / dl; 480 je koeficient vypočítaný spoločnosťou Bessey na stanovenie karotenoidov; E480 je optická hustota skúšobného roztoku.

Poznámka

Podľa Besseyho je možné počas štúdií brať väčšie alebo menšie objemy séra, ale jeho pomer k objemu alkoholového roztoku by mal byť konštantný pri akejkoľvek zmene objemu (množstva) zmesi xylén-oktán.

Normou v obsahu vitamínu A v krvnom sére je: u novorodencov a dojčiat - 160-270 μg / l; u dospelých 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Obsah karotenoidov v dospelom sére je 800 až 2300 μg / l.