Diagnóza herpes

Diagnóza herpes je založený na správanie klasického šírenia vírusu v citlivých bunkových kultúrach, imunofluorescencie a sérologické metódy, vykonávanie kolposkopických štúdie za použitia moderných molekulárno-biologických metód (PCR, dot-hybridizácia), ktorý umožňuje diagnostikovať všetky skupiny herpesvírus, vrátane HHV-6 a HHV-7 typy.

Metódy laboratórnej diagnostiky herpetickej infekcie

Hlavné metódy zamerané na vylučovanie HSV alebo detekciu vírusových častíc a / alebo ich zložiek	Pomocné metódy zamerané na detekciu protilátok proti HSV v biologických tekutinách ľudského tela
Izolácia HSV v citlivých kultúrach buniek a zvierat Priama a imunná elektrónová mikroskopia Priame a nepriame možnosti MFA IFA Molekulárne biologické metódy Latexová aglutinačná reakcia	Neutralizačná reakcia RSK Stanovenie protilátok proti neštrukturálnym proteínom HSV-1,2

Ukazuje sa, že 76% pacientov má genitálny herpes (GH) spôsobený HSV-2 a 24% - typ HSV-1. A GG ako monoinfekcia sa vyskytla iba u 22% pacientov, v 78% prípadov boli zistené mikrobiálne asociácie. U 46% pacientov bola detekovaná parazitocenóza spôsobená dvoma patogénmi, vrátane 40% zistených chlamýdií. Menej často v škvŕn určených gardnerelly, Trichomonas, gonokokov.

U 27% pacientov bola parazitocenóza reprezentovaná troma a 5,2% štyrmi patogénmi. A častejšie sa vyskytovala kombinácia chlamýdií s Gardnerella a Candida hubami. Tieto údaje by potvrdilo potrebu dôkladného bakteriologické vyšetrenie pacientov YY na identifikáciu kombinácie patogénov, ako aj hĺbkovú štúdiu o patogenéze zmiešaných infekcií urogenitálneho traktu, ktorý by umožnil diferencované komplexnej terapie infekcie HSV.

Materiály, ktoré sa majú študovať pri izolácii HSV v závislosti od lokalizácie herpetických lézií

Lokalizácia lézií	Obsah vezikúl	Škrabanie buniek				SMZ	Nasiakajte z priedušiek	Biopsia vzorka	Krvný
		1	2	3	4
Koža	+								+
Oči			+						+
Genitálie				+					+
Riť	+				+				+
ústa	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Pľúca		+					+		+
Pečeň								+	+
Vrodený herpes	+	+	+				+		+

Metódy laboratórnej diagnostiky cytomegalovírusovej infekcie

Metódy	Čas potrebný na získanie výsledkov	Poznámky
Virologické
Elektrónová mikroskopia	3 hodiny	Malodostupen
Izolácia vírusu v bunkovej kultúre (CPD)	4-20 dní	Štandardné, Pomalé
Imunofluorescenčné zafarbenie skorého AH s monoklonálnymi protilátkami	6 hodín	Menej špecifické
TSITOLOGICHESKIY	2-3 hodiny	Menej špecifické
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 dni	Standard
Ssubsistence	1 deň	časovo náročné
RIF	6 hodín	Jednoduché, špecifické
NRIF	6 hodín	Komplexné
RIMF	6 hodín	Komplexné
IFA (IgM, TO)	6 hodín	Rýchle, jednoduché
Imunoblot	6 hodín	Drahý
Molekulárne biologické
MG	5-7 dní	Nákladné, časovo náročné
PCR	3 hodiny	Drahý

Metódy diagnostiky vírusu herpes zoster

Diagnostické metódy	Laboratórne techniky
NEPRIAMA
Pridelenie	Tkanivová kultúra, kuracie embryá, laboratórne zvieratá, kokultivácia s permisívnymi bunkami alebo pomocnými vírusmi
Identifikácia izolátov	Neutralizačná reakcia, DSC, IF, IPPE, reakcia zrazeninových izolátov, aglutinácia, IF
STRAIGHT
Cytológia	Smears: farebná imunofluorescencia
Histológia	Patomorfológia bunky
štruktúra	Embryonálna mikroskopia, imunoelektronická mikroskopia
Stanovenie antigénov	AK, PIÉF, RIM, IFA
Určenie lokálnej produkcie protilátok	IgM, IgG, IgA: IFA, RIA
Molekulárne biologické prístupy	Molekulárna hybridizácia, PCR

Laboratórna diagnostika infekcie spôsobenej vírusom herpes zoster

Diagnostické problémy	Metódy	Očakávané výsledky
Akútna primárna infekcia	1	Detekcia po 2 hodinách
	2	Úroveň protilátok rastie pomaly
	3	Prezentujte 3 dni po infekcii
Akútna opätovne aktivovaná infekcia	1	Detekcia ULV za 2 hodiny
	2	Úroveň protilátok rastie pomaly
	4	Prezentujte 4 dni po objavení vyrážok

1. stanovenie WIEF v tekutine vezikúl;
2. serológia: DSC, ELISA, zameraná na identifikáciu
3. sérologické vyšetrenie: test ELISA zameraný na detekciu IgM;
4. serológia: test ELISA zameraný na detekciu IgA, IgM.

Metódy na indikáciu imunitnej odpovede infekcie spôsobenej vírusom herpes zoster

Prístup	Metóda
Detekcia zvýšeného protilátkového titra v druhom sére	RSK, RTGA, RPGA, neutralizačná reakcia IF, RIM, ELISA
Detekcia IgG, Ig A triedy špecifických protilátok v prvej vzorke séra	IFA, IF, RIM, latexová aglutinácia

Interpretácia výsledkov sérologického vyšetrenia séra pacienta na herpesvírusové infekcie (ELISA)

Názov infekcie / marker	Priemerné prahové hodnoty pre infekcie
	Výsledky analýzy	Interpretácia
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100 až 300%)	Pozitívne 1-6 pozitívne 6-10 pozitívne> 10 negatívne pozitívne 100-300 negatívne <90 pochybné 90-100	Remisia Zhoršenie ochorenia Akútna fáza choroby Žiadna infekcia (ochorenie) Akútna fáza choroby Opakujte analýzu po 2-3 týždňoch
Herpes simple 1,2 sérotypy Anti-HSV 1/2 celkom. (100-900%)	Pozitívny 100-400 Pozitívny 400-800 Pozitívny> 800 Negatívny <100	Remisia Zhoršenie ochorenia Akútna fáza choroby Žiadna infekcia (ochorenie)

V tabuľke sú uvedené hlavné metódy laboratórnej diagnostiky herpesvírusových infekcií a tiež sa odporúčajú biologické materiály, ktoré sa skúmajú v izolácii HSV s prihliadnutím na lokalizáciu herpetických lézií

Spoľahlivé je rozdelenie herpes simplexu a CMV prostredníctvom infekcie citlivých bunkových kultúr. V virologickom vyšetrení 26 pacientov v období recidívy bol HSV izolovaný na citlivej bunkovej kultúre Vero v 23 prípadoch (88,4%). V infikovaných kultúrach sa pozoroval vzor cytopatického účinku charakteristický pre HSV - tvorba mnohonárodných obrovských buniek alebo akumulácia zaoblených a zväčšených buniek vo forme zväzkov. V 52,1% prípadov bolo možné detegovať ohniská cytopatického účinku vírusu 16 až 24 hodín po infekcii. V 48 až 72 hodinách inkubácie infikovaných kultúr sa percento materiálov spôsobujúcich špecifickú deštrukciu buniek zvýšilo na 87%. A iba v 13% prípadov boli pozitívne výsledky detegované 96 hodín po infekcii a viac alebo s opakovaným pasážovaním.

Metódy laboratórnej diagnostiky generalizovanej herpetickej infekcie

Hlavné metódy zamerané na detekciu (izoláciu) herpesvírusov, ich častíc a ich zložiek	Pomocné metódy zamerané na detekciu protilátok proti herpes vírusom v biologických tekutinách, ktoré zisťujú enzymatické posuny v krvnom sére
Izolácia vírusu Herpes na citlivých bunkových kultúrach a zvierat s priamym a imunitný elektrónovej mikroskopie metódy priame a nepriame imunoperoxidázové prevedeniach priame a nepriame voľby fluorescenčné technika protilátka možnosti ELISA prevedeniach molekulárnej (DNA-DNA) hybridizují PCR reakcie latexovou aglutináciou	Neutralizačné fixačný reakcie latexová aglutinácia Nepriama fluorescenčné metóda protilátka prevedení nepriamej imunoperoxidázové metódy variant prevedení ELISA metóda imunitný savý radiálne fixáciu Metóda komplement Stanovenie alanínu a aspartát úrovni

Na diagnostiku infekčnej mononukleózy (infekcie spôsobenej VEB) sa používajú sérologické metódy. Reakcia Paul-Bunnelya ovčími erytrocyty, titer 1:28, diagnostických a vyššie pre jediné štúdie séra, alebo zvýšenie 4-násobným protilátok pri skúmaní párových sér. Použite Goff-Bauerovu reakciu so suspenziou 4% formalizovaných červených krviniek koňa. Výsledok sa berie do úvahy po 2 minútach, pričom infekčná mononukleóza je vysoko špecifická.

V súčasnej dobe sa vyvinula enzýmová imunoanalýza (ELISA) na diagnostiku infekčnej mononukleózy. V tomto prípade sú IgG a IgM protilátky v sére pacienta určené inkubáciou s lymfoblastmi infikovanými EBV, po ktorej nasleduje liečba fluorescenčnými protilátkami. V akútnom období ochorenia sa stanovia protilátky proti vírusovému kapsidovému antigénu s titrom 1: 160 a vyššie.

Pri použití množstva importovaných komerčných testovacích systémov v IFA môže určiť: protilátky proti mravcov obálky protilátok Egan EBV k skorému antigénu EBV, celkové protilátky k skorej antigénu EBV, stanovené v akútnej fáze ochorenia a v jadre a v cytoplazme a obmedzenej protilátky EBV čoskoro, určuje v akútnej fáze ochorenia a v jadre a v cytoplazme buniek, ktorý je ohraničený protilátky proti EBV skorý antigén, stanovených v stredu ochorenia iba v cytoplazme buniek a protilátok proti EBV jadrového antigénu. Použitie týchto testovacích systémov umožňuje diferenciálnu diagnostiku mnohých ochorení spojených s EBV.

Po kladnom ELISA pre identifikáciu protilátok EBV dávajú imunoblotové potvrdzujúci reakciu, ktoré detekujú prítomnosť protilátok pre oddelenie EBV proteínové markery (P-proteíny): P23, P54, P72 (prítomnosť proteínu naznačuje možnosť reprodukcie EBV), str 138. Said vyššie uvedené laboratórne metódy sa používajú na kontrolu účinnosti liečby.

Citlivosť virologických metód je 85-100%, špecifickosť je 100%, doba štúdia je 2-5 dní. Často sa v praxi používa metóda priamej imunofluorescencie (PIF) s polyklonálnymi alebo monoklonálnymi protilátkami proti HSV-1 a HSV-2. Metóda UIF sa dá ľahko reprodukovať v bežnej klinickej laboratóriu, nie je nákladná, citlivosť je vyššia ako 80%, špecificita je 90-95%. Výsledkom imunofluorescenčného mikroskopia odhalila prítomnosť cytoplazmatických inklúzií, morfologické znaky, percento infikovaných buniek v náteroch, škrabancov uretry, krčka maternice, krčok maternice, rektum.

Metóda UIF poskytuje myšlienku morfologických vlastností buniek a zmien v lokalizácii HSV antigénov. Okrem priamych znakov poškodenia buniek herpes vírusmi (detekcia špecifickej luminiscencie) existujú nepriame príznaky herpetickej infekcie podľa údajov UIF:

• agregácia jadrovej hmoty, exfoliacia karyoolmy;
• prítomnosť tzv. Jadrové "otvory", keď z jadra bunky zostáva len jedna karyolemma;
• prítomnosť intranukleárnych inklúzií - Caudryho teľa.

Pri nastavovaní UIF lekári dostanú nielen kvalitu, ale aj kvantitatívne posúdenie infikovaných buniek, ktoré sme boli použité na vyhodnotenie účinnosti antivírusovej liečby sa acyklovir (AC). Takto bolo 80 pacientov s jednoduchým genitálnym herpesom (GG) skúmaných metódou UIF v dynamike. Je ukázané, že v prípade, pred ošetrením acykloviru v náteroch 88% pacientov malo vysoké percento infikovaných buniek (50-75% a vyššie), po jednom priebehu acykloviru v náteroch 44% pacientov so zdravými bunkami zistených v 31% prípadov sú označené jednotlivé infikované bunky a 25% pacientov malo až 10% infikovaných buniek.

Obsah infikovaných buniek v náteroch (PIF reakcia) pacientov s genitálnym herpesom liečených acyklovirom

Ochorenia	Percento škvrny
	Infikovaných buniek					Normálne bunky
	Viac ako 75%	50-75%	40-50%	10%	Jednotlivé bunky v n / sp
Relaps (pred liečbou)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisia (po liečbe)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Použitím mnohoročných UIF a metódy dot-hybridizácie sa takmer 100% prípadov zhodovalo s výsledkami štúdie. Je potrebné poznamenať, že za účelom zvýšenia spoľahlivosti diagnóze GH, a to najmä v prípadoch, keď existuje subklinického a malomanifestnyh formy herpes, sa odporúča použiť 2-3 metódu laboratórnej diagnostiky, najmä pri skúmaní tehotné ženy, ženy s pôrodníckej anamnézy znevýhodnené, ľudia s nešpecifikovaným gynekologické diagnózy.

Tak, pre PCR diagnostiku vírusových a bakteriálnych infekcií urogenitálneho traktu, je nutné vyhodnotiť pozitívne výsledky získané s históriou, prítomnosť (alebo neprítomnosť) špecifických klinických symptómov. Ak sa deteguje chlamýdie pomocou PCR, potom je v tomto prípade možné hovoriť o infekcii a zodpovedajúcim spôsobom riešiť problémy s liečbou. V prípade zistenia mykoplaziem (Ureaplasma) sú oportúnne patogény, na potvrdenie diagnózy je potrebné vykonať ďalšie štúdie kultúry, t. E. Crop materiál z pacient citlivý na bunkových kultúrach. Len vtedy, keď sa v kultúrnej analýze získajú pozitívne výsledky, môžeme hovoriť o laboratórnom potvrdení diagnózy mykoplazmózy. Rovnaká metóda umožní v prípade potreby určiť citlivosť izolovaných mykoplaziem na často používané liečebné formy (antibiotiká, fluorochinolóny atď.).

Možno jednostupňovú infekciu s niekoľkými vírusmi z čeľade Nepresviridae. Často sme zistili infekciu jedného pacienta s vírusmi HSV-1, HSV-2 a CMV. Mnoho častejšie infikovaných niekoľkými herpes vírusmi boli pacienti s klinickými a laboratórnymi prejavmi sekundárneho IDS (pacienti s onkohematologickými, onkologickými, infikovanými vírusmi HIV). Preto sa ukazuje, že klinické a imunologické poruchy, ktoré prebiehajú s infekciou HIV, sú sprevádzané zvýšeným počtom herpesvírusov detegovaných molekulárnou hybridizáciou. V tejto prognosticky najvýznamnejšej je možné považovať komplexnú jednoprocesovú detekciu DNA typu HSV-1, CMV a HHV-6.

[1], [2], [3]