Vírus hepatitídy A

Vírusová hepatitída A je infekčné ochorenie ľudí, ktoré sa vyznačuje predovšetkým poškodením pečene a klinicky sa prejavuje intoxikáciou a žltačkou. Vírus hepatitídy A objavil v roku 1973 S. Feinstone (a kol.) pomocou metódy imunitnej elektrónovej mikroskopie a infikovaním opíc - šimpanzov a kosmáčov. Podstata metódy imunitnej elektrónovej mikroskopie spočíva v tom, že do filtrátu stolice pacienta s hepatitídou A sa pridajú špecifické protilátky (rekonvalescentné sérum) a sediment sa podrobí elektrónovej mikroskopii. V dôsledku interakcie vírusov so špecifickými protilátkami dochádza k ich špecifickej agregácii. V tomto prípade sa ľahšie detegujú a agregácia pod vplyvom protilátok potvrdzuje špecifickosť patogénu. Objav S. Feinstonea bol potvrdený v experimentoch na dobrovoľníkoch.

Vírus hepatitídy A je sférický, priemer viriónu je 27 nm. Genóm je reprezentovaný jednovláknovou pozitívnou RNA s mm 2,6 MD. Neexistuje superkapsida. Typ symetrie je kubický - ikozaedrón. Kapsida má 32 kapsomér, je tvorená štyrmi polypeptidmi (VP1-VP4). Podľa svojich vlastností patrí vírus hepatitídy A do rodu Heparnovirus, čeľade Picornaviridae. Z hľadiska antigénov je vírus hepatitídy A (HAV - hepatitis A virus) homogénny. HAV sa dobre reprodukuje v tele šimpanzov, paviánov, paviánov hamadryových a opíc kosmáčov. Dlho sa vírus nedal kultivovať. Až v 80. rokoch 20. storočia sa podarilo získať bunkové kultúry, v ktorých sa HAV reprodukuje. Spočiatku sa na tieto účely používali kontinuálne bunkové línie obličiek embrya makaka rézus (kultúra FRhK-4) a teraz sa používa kontinuálna bunková línia buniek obličiek opice zelenej (kultúra 4647).

Podľa odporúčaní expertov WHO bola prijatá nasledujúca nomenklatúra markerov vírusu hepatitídy A: vírus hepatitídy A - protilátky HAV proti vírusu hepatitídy A: anti-HAV IgM a anti-HAV IgG.

HAV je malá častica s priemerom 27-30 nm, ktorá má ikosaedrickú symetriu a homogenitu. Elektrogram získaný metódou imunitnej agregácie odhaľuje elektrónovo husté častice s povrchovo umiestnenými symetricky usporiadanými kapsomérmi. Pri negatívnom kontraste sa v preparátoch odhaľujú plné aj prázdne častice. Nukleokapsida HAV, na rozdiel od chrípky, nemá povrchové výčnelky a membránu. Dôležité je tiež, že virión HAV nemá srdcovitú štruktúru.

Na základe svojich fyzikálno-chemických vlastností je vírus hepatitídy A klasifikovaný ako patriaci do čeľade pikornavírusov, rodu enterovírusov s poradovým číslom 72. Táto taxonómia sa však ukázala byť príliš nezvyčajná a WHO považovala za možné zachovať terminológiu „vírus hepatitídy A“.

Tak ako všetky vírusy z čeľade Picornaviridae, aj vírus hepatitídy A obsahuje ribonukleovú kyselinu. Niektoré laboratóriá preukázali možnosť klonovania genómu vírusu hepatitídy A, čo otvára vyhliadky na získanie vakcín.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Rezistencia na vírus hepatitídy A

Vírus je relatívne odolný voči vysokým teplotám, kyselinám, tukovým rozpúšťadlám (neobsahuje lipidy), dezinfekčným prostriedkom a dobre znáša nízke teploty. To všetko prispieva k jeho dlhodobému uchovávaniu vo vonkajšom prostredí. Pri izbovej teplote prežíva niekoľko týždňov, pri 60 °C čiastočne stráca svoju infekčnosť po 4 – 12 hodinách a úplne – po niekoľkých minútach pri 85 °C. Je vysoko odolný voči chlóru, vďaka čomu je schopný preniknúť do vody z vodovodu cez bariéry čistiarní vody.

Zhrnutím všetkých údajov môžeme vírus hepatitídy A charakterizovať takto:

• prirodzeným hostiteľom je človek;
• pokusné zvieratá - kosmáče, šimpanzy;
• zdrojom infekcie sú výkaly;
• choroba je epidemická a endemická;
• cesta prenosu: fekálno-orálna;
• inkubačná doba - 14-40 dní;
• prechod na chronickú hepatitídu - nepozorovaný.

Imunologické vlastnosti HAV sú nasledovné:

• Prototypové kmene - Ms-1, CR-326, GВG. Všetky sú imunologicky podobné alebo identické;
• Protilátky - IgM a IgG, sa produkujú ako reakcia na zavedenie štrukturálnych proteínov vírusu a majú ochranné účinky;
• I. Ochranný účinok ľudského sérového gamaglobulínu – predchádza ochoreniu alebo ho zmierňuje, ak sa podá pred infekciou alebo počas inkubačnej doby.

Fyzikálno-chemické vlastnosti NAU sú nasledovné:

• Morfológia: bezškrupinová guľovitá častica s kubickou symetriou, kapsida pozostáva z 32 kapsomér;
• Priemer - 27-30 nm;
• Hustota v CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (otvorené častice), 1,33-1,34 (zrelý virión), 1,29-1,31 (nezrelé virióny, prázdne častice);
• Sedimentačný koeficient - 156-160 zrelých viriónov;
• Nukleová kyselina je jednovláknová lineárna RNA;
• Relatívna molekulová hmotnosť - 2,25 x 106 - 2,8 x 106KD;
• Počet nukleotidov je 6 500 – 8 100.

Stabilita HAV pri fyzikálnych a chemických vplyvoch je nasledovná:

• Chloroform, éter - stabilný;
• Chlór, 0,5 – 1,5 mg/l, 5 °C, 15 min – čiastočná inaktivácia;
• Chlóramín, 1 g/l, 20 °C, 15 min - úplná inaktivácia;
• Formalín, 1:4000, 35 – 37 °C, 72 h – úplná inaktivácia, 1:350, 20 °C, 60 min – čiastočná inaktivácia.

Teplota:

• 20 – 70 °C – stabilné;
• 56 °C, 30 min - stabilný;
• 60 °C, 12 h - čiastočná inaktivácia;
• 85 °C, 1 min - úplná inaktivácia;
• Autoklávovanie, 120 °C. 20 min - úplná inaktivácia;
• Suché teplo, 180 °C, 1 hodina - úplná inaktivácia;
• UFO, 1,1 W, 1 min - úplná inaktivácia.

Z prezentovaných údajov vyplýva, že vírus hepatitídy A sa svojimi fyzikálno-chemickými vlastnosťami najviac podobá enterovírusom. Podobne ako iné enterovírusy, aj HAV je rezistentný voči mnohým dezinfekčným roztokom a pri teplote 85 °C a autoklávovaní sa úplne inaktivuje v priebehu niekoľkých minút.

Bolo dokázané, že vírus hepatitídy A sa môže reprodukovať v primárnych a kontinuálnych monovrstvových líniách ľudských a opičích bunkových kultúr. Obzvlášť aktívna reprodukcia vírusu hepatitídy A v kultúrach in vitro sa pozoruje pri použití pečeňových extraktov z chorých opíc ako východiskového materiálu. Treba však poznamenať, že vo všetkých experimentoch s reprodukciou vírusu hepatitídy A v kultúrach in vitro sa pozornosť upriamuje na dlhú inkubačnú dobu počas primárnych pasáží (až 4-10 týždňov), následne sa zvyšuje akumulácia genetického materiálu vírusu, ale absolútne hodnoty zostávajú veľmi nevýznamné, čo dáva mnohým výskumníkom dôvod hovoriť o neúplnej replikácii vírusu hepatitídy A v tkanivových kultúrach.

Zhrnutím údajov z literatúry o reprodukcii vírusu hepatitídy A v extratkanivových kultúrach možno konštatovať, že fakt dlhodobého prežitia HAV in vitro je nepochybný. Optimálne podmienky pre stabilnú vysokú úroveň replikácie vírusu neboli definitívne identifikované, čo bráni štúdiu jeho biologických vlastností, získaniu zdroja činidiel na výrobu diagnostických prostriedkov a návrhu vakcín.

Zároveň sa v literatúre nachádzajú optimistickejšie úsudky o tomto probléme. Riešenie všetkých otázok súvisiacich s kultiváciou vírusu hepatitídy A je otázkou blízkej budúcnosti. Pri štúdiu optimálnych podmienok pre reprodukciu HAV v kultúre embryonálnych buniek obličiek makaka rézus boli identifikované dve fázy: fáza produkcie infekčného vírusu (do 6-8 dní na úrovni 5. pasáže) a fáza intenzívnej akumulácie vírusového antigénu. Ukázalo sa tiež, že k najvýznamnejšej akumulácii vírusového antigénu dochádza za podmienok tzv. valcovej kultivácie (rotujúce banky). Táto metóda otvára široké možnosti pre získanie kultúrneho antigénu vo veľkých množstvách, a preto sa objaví východiskový materiál na prípravu diagnostických systémov a výrobu vakcín.

Epidemiológia hepatitídy A

Vírus hepatitídy A je pre ľudí vysoko patogénny. Podľa WHO (1987) stačí na vyvolanie ochorenia infekcia iba jedným viriónom. Praktická infekčná dávka je však pravdepodobne oveľa vyššia. Jediným zdrojom infekcie je infikovaná osoba. Vírus sa vylučuje vo veľkom množstve stolicou 12 – 14 dní pred nástupom žltačky a počas 3 týždňov ikterického obdobia. Neboli zistené žiadne významné rozdiely vo vylučovaní patogénu u pacientov s ikterickou, anikterickou a asymptomatickou formou hepatitídy A. Cesta infekcie je fekálno-orálna, prevažne vodnou cestou, ako aj domácou a alimentárnou cestou. Cesta infekcie je fekálno-orálna, prevažne vodnou cestou, ako aj domácou a alimentárnou cestou. Hlavnou (primárnou) cestou prenosu vírusu je vodná cesta. Možná je aj infekcia kvapôčkami vo vzduchu. Náchylnosť populácie je univerzálna. Postihnuté sú prevažne deti do 14 rokov. Ochorenie má výraznú jesenno-zimnú sezónnosť.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Príznaky hepatitídy A

Inkubačná doba sa pohybuje od 15 do 50 dní v závislosti od infekčnej dávky vírusu, ale v priemere je 28 – 30 dní. Po vniknutí do tela sa vírus hepatitídy A množí v regionálnych lymfatických uzlinách, preniká do krvi a potom do pečeňových buniek a spôsobuje akútnu difúznu hepatitídu, ktorá je sprevádzaná poškodením hepatocytov a retikuloendotelových prvkov pečene a znížením jej detoxikačnej a bariérovej funkcie. Poškodenie hepatocytov nenastáva v dôsledku priameho pôsobenia vírusu, ale v dôsledku imunopatologických mechanizmov. Najtypickejším obrazom hepatitídy A je akútna ikterická cyklická forma: inkubačná doba, prodromálne (predikterické), ikterické obdobie a rekonvalescencia. V ložiskách infekcie sa však zisťuje veľký počet pacientov s anikterickými a asymptomatickými formami infekcie, ktorých počet výrazne prevažuje nad ikterickými („ľadovcový fenomén“).

Postinfekčná imunita je silná a dlhotrvajúca, spôsobená protilátkami neutralizujúcimi vírus a pamäťovými bunkami imunitného systému.

Mikrobiologická diagnostika hepatitídy A

Diagnostika hepatitídy A (okrem infekcie zvierat - šimpanzov, kosmáčov, paviánov, ktoré nemáme k dispozícii) je založená na rôznych imunologických metódach: RSC, imunofluorescenčná metóda, hemaglutinácia imunitnej adhézie (komplex vírusový antigén + protilátka sa v prítomnosti komplementu adsorbuje na erytrocyty a spôsobuje ich zlepenie). Možnosti použitia týchto metód sú však obmedzené kvôli nedostatku špecifických vírusových antigénov a imunofluorescenčná reakcia vyžaduje biopsiu pečene, čo je nežiaduce. Metóda imunitnej elektrónovej mikroskopie je spoľahlivá a špecifická, ale je veľmi prácna. Preto je zatiaľ jedinou prijateľnou imunologickou reakciou metóda imunosorbentnej analýzy pevnej fázy vo forme IFM alebo RIM, najmä v modifikácii "zachytenia" imunoglobulínov triedy M. V našej krajine bol na tento účel navrhnutý testovací systém - "DIAGN-A-HEP". Princíp fungovania tohto testovacieho systému je nasledovný. Najprv sa na steny polystyrénových jamiek sorbujú protilátky proti imunoglobulínom triedy M (antiimunoglobulíny M), potom sa pridá testované sérum pacienta. Ak obsahuje protilátky IgM, viažu sa na protilátky triedy M, potom sa pridá špecifický vírusový antigén (vírus hepatitídy A), ktorý sa získa pestovaním v bunkovej kultúre. Systém sa premyje a pridajú sa k nemu antivírusové protilátky značené chrenovou peroxidázou. Ak všetky štyri zložky systému interagujú, vytvorí sa štvorvrstvový „sendvič“:

• antiimunoglobulíny M,
• imunoglobulíny M (proti vírusu hepatitídy A - v sére skúmaného pacienta),
• vírusový antigén,
• enzýmom značené antivírusové protilátky.

Na detekciu tohto komplexu sa do jamiek pridá substrát pre enzým. Pod vplyvom enzýmu sa rozruší a vytvorí sa farebný produkt. Intenzitu farby je možné kvantitatívne merať pomocou spektrofotometra alebo fotokolorimetra.

Výhodou metódy „zachytávania“ IgM je, že protilátky tejto triedy imunoglobulínov sa objavujú počas primárnej imunitnej odpovede a indikujú aktívne štádium infekcie, po prekonaní ochorenia miznú. Antivírusové protilátky patriace do triedy IgG naopak pretrvávajú dlho po prekonaní ochorenia a zabezpečujú získanú imunitu. Na detekciu vírusu hepatitídy A bola navrhnutá metóda DNA sondy: ako sonda sa používa komplementárna vRNA DNA.

Liečba hepatitídy A

Vzhľadom na to, že pri vírusovej hepatitíde je narušená produkcia interferónu, liečba hepatitídy A je založená na použití interferónu a induktora jeho endogénnej syntézy, amixínu.

Špecifická prevencia hepatitídy A

Predtým široko používaná séroprofylaxia hepatitídy A gama globulínom sa neospravedlnila, preto sa hlavný dôraz kládol na vykonávanie očkovacej profylaxie, vykonáva sa očkovanie proti hepatitíde A. Na tento účel sa vyvíjajú a už používajú rôzne typy vakcín. V Rusku bola účinná vakcína proti hepatitíde A získaná už v roku 1995 a teraz sa úspešne používa.