Vírus hepatitídy A

Vírusová hepatitída A je ľudská infekčná choroba charakterizovaná prevládajúcim poškodením pečene a prejavom klinickej intoxikácie a žltačky. Vírus hepatitídy A bol detekovaný v roku 1973 S. Feinstoneom (a ďalšími) pomocou metódy imunologickej elektrónovej mikroskopie a infikovaním opíc - šimpanzov a kosatcov. Podstatou metódy imunitnej elektrónovej mikroskopie je, že do filtrátu výkalov pacienta s hepatitídou A sa pridajú špecifické protilátky (sérum rekonvalescencie) a zrazenina sa podrobí elektrónovej mikroskopii. V dôsledku interakcie vírusov so špecifickými protilátkami podliehajú špecifickej agregácii. V tomto prípade sú ľahšie detegované a agregácia pod vplyvom protilátok potvrdzuje špecifickosť patogénu. Objav S. Feinstonea bol potvrdený v experimentoch na dobrovoľníkoch.

Vírus hepatitídy A má sférický tvar, priemer viriónu je 27 nm. Genóm predstavuje jednoreťazcová pozitívna RNA s hmotnosťou 2,6 MD. Supercapsid chýba. Typ symetrie je kubický - ikosahedrón. Kapsid má 32 kapsomérov, je tvorený štyrmi polypeptidmi (VP1-VP4). Vďaka svojim vlastnostiam vírus hepatitídy A patrí do rodu Heparnovirus, rodiny Picornaviridae. Antigénne, vírus hepatitídy A (HAV - vírus hepatitídy A) je homogénny. HAV sa dobre rozmnožuje v tele šimpanzov, paviánov, hamadrylov a opice (kosatky). Po dlhú dobu sa vírus nemohol kultivovať. Iba v 80-tych rokoch. Bolo možné získať bunkové kultúry, v ktorých sa šíri HAV. Spočiatku sa na tieto účely použili transplantované obličkové línie ledviny opice rhesus (kultúra FRhK-4) a teraz - transplantovaná línia obličkových buniek zelených opíc (kultúra 4647).

Podľa odporúčaní odborníkov WHO bola prijatá nasledujúca nomenklatúra markerov vírusu hepatitídy A: vírus hepatitídy A-NAU proti vírusu hepatitídy A: anti-NAV IgM a anti-NAV IgG.

HAV sú malé častice s priemerom 27 - 30 nm, s ikosahedrálnou symetriou a homogenitou. Na elektrónovom difraktograme získanom metódou imunitnej agregácie sú detekované elektrón-husté častice s povrchovo umiestnenými symetricky usporiadanými kapsomérmi. S negatívnym kontrastom sa v prípravkoch zistia ako úplné, tak aj prázdne častice. Nukleokapsid NAV, na rozdiel od chrípky, nemá povrchové výčnelky a membrány. Je tiež dôležité, aby virión HAV nemal srdcovú štruktúru.

Podľa jeho fyzikálno-chemických vlastností vírusu hepatitídy A sa vzťahuje k rodine picornaviridae, rod enterovírus s atómovým číslom 72. To však taxonómie bola príliš nezvyčajné a WHO zistil, že je možné nechať terminológii "vírusu hepatitídy A".

Rovnako ako všetky vírusy rodiny Picornaviridae, vírus hepatitídy A obsahuje ribonukleovú kyselinu. Niektoré laboratóriá preukázali možnosť klonovania genómu vírusu hepatitídy A, čo otvára možnosť získať očkovacie prípravky.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Odolnosť vírusu hepatitídy A

Vírus je relatívne odolný voči vysokej teplote, kyselinám, tukovým rozpúšťadlám (nie sú lipidy), dezinfekčným prostriedkom, toleruje nízku teplotu. To všetko prispieva k jeho dlhodobému zachovaniu vo vonkajšom prostredí. Pri izbovej teplote prežil niekoľko týždňov, pri 60 ° C čiastočne stráca infekčnosť po 4-12 hodinách, úplne - po niekoľkých minútach pri 85 ° C Vysoko odolný voči chlóru, vďaka ktorému je schopný preniknúť do vodovodnej vody cez prekážky čistiarní vody.

Sumarizáciou všetkých údajov môžeme charakterizovať vírus hepatitídy A nasledovne:

• prírodný pán je človek;
• experimentálne zvieratá - marmozet, šimpanz;
• zdroj infekcie - výkaly;
• choroba - epidémia a endemia;
• prenosová cesta je fekálne-orálna;
• inkubačná doba - 14 - 40 dní;
• prechod na chronickú hepatitídu - neuvedené.

Imunologické vlastnosti NAV sú nasledovné:

• Prototypové kmene - Ms-1, CR-326, GVG. Všetky sú imunologicky podobné alebo identické;
• Protilátky - IgM a IgG sa produkujú ako odpoveď na zavedenie štrukturálnych proteínov vírusu a sú ochranné;
• I Trofické pôsobenie ľudského sérového y-globulínu - ochraňuje alebo zmierňuje chorobu pod podmienkou podania pred infekciou alebo počas inkubácie.

Fyzikálno-chemické charakteristiky NAU sú nasledovné:

• Morfológia je sférická častica bez krytu s kubickou symetriou, kapsid pozostáva z 32 kapsomérov;
• Priemer je 27 až 30 nm;
• Hustota v CsCl (g / cm3) je 1,38-1,46 (otvorené častice), 1,33-1,34 (zrelý virión), 1,29-1,31 (nezrelé virióny, prázdne častice);
• Sedimentačný koeficient je 156 až 160 dospelých viriónov;
• Nukleová kyselina - jednovláknová lineárna RNA;
• Relatívna molekulová hmotnosť - 2,25 106-2,8 106KD;
• Počet nukleotidov je 6 500 - 8 100.

Stabilita NAV vo fyzikálno-chemických účinkoch je nasledujúca:

• Chloroform, éter - je stabilný;
• Chlór, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - čiastočná inaktivácia;
• Chloramín, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - úplná inaktivácia;
• Formalín, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 hodín - úplná inaktivácia, 1: 350, 20 ° C, 60 min - čiastočná inaktivácia.

Teplota:

• 20-70 ° C - stabilný;
• 56 ° C, 30 minút - je stabilný;
• 60 ° С, 12 hodín - čiastočná inaktivácia;
• 85 ° C, 1 min - úplná inaktivácia;
• Autoklávovanie, 120 ° C. 20 minút - úplná inaktivácia;
• Suché teplo, 180 ° C, 1h - úplná inaktivácia;
• UV, 1,1 W, 1 min - úplná inaktivácia.

Predložené údaje ukazujú, že fyzikálno-chemické vlastnosti vírusu hepatitídy A sú najbližšie k enterovírusom. Podobne ako iné enterovírusy je HAV rezistentná na mnohé dezinfekčné roztoky, úplne inaktivované niekoľko minút pri teplote 85 ° C a autoklávované.

Dokázalo sa, že vírus hepatitídy A sa môže reprodukovať v primárnych a transplantovaných monovrstvových kultivačných líniách ľudských a opičích buniek. Obzvlášť aktívna reprodukcia vírusu hepatitídy A v kultúrach in vitro sa pozoruje, keď sa ako východiskový materiál použijú pečeňové extrakty opíc. Malo by však byť poznamenané, že vo všetkých experimentoch podľa reprodukciu vírusu hepatitídy A v kultúrach in vitro za zmienku dlhá inkubačná doba v primárnych pasážach (-10 až 4 týždne), následne akumuláciu vírusové genetické zvyšuje materiálu, ale absolútne hodnoty sú veľmi čo je dôvodom pre mnohých výskumníkov, aby hovorili o neúplnej replikácii vírusu hepatitídy A v tkanivových kultúrach.

Zhrnutie údajov z literatúry o reprodukcii vírusu hepatitídy A z nekoreínových kultúr možno povedať, že skutočnosť dlhodobej skúsenosti s HAV in vitro je nespochybniteľná. Optimálne podmienky pre stabilnú vysokú úroveň vírusovej replikácie neboli konečne identifikované a to obmedzuje štúdium jej biologických vlastností, produkciu zdroja činidiel na výrobu diagnostických látok a návrh vakcín.

Zároveň sa v literatúre nachádzajú optimistickejšie úvahy o tomto probléme. Riešenie všetkých problémov týkajúcich sa kultivácie vírusu hepatitídy A je záležitosťou v blízkej budúcnosti. Pri štúdiu Optimálne podmienky HAV šírenie v bunkovej kultúre embryonálnych obličiek opíc rézus odhalila dve fázy: fáza infekčné vírusové produkcie (až 6-8 dní v 5. Pasáži) a fázy intenzívneho akumuláciu vírusového antigénu. Ukazuje sa tiež, že najvýznamnejšia akumulácia vírusového antigénu nastáva v podmienkach tzv. Kultivácie (rotujúce fľaše). Týmto spôsobom sa otvárajú široké možnosti získania kultúrneho antigénu vo veľkých množstvách a následne sa objaví východiskový materiál na prípravu diagnostických systémov a výrobu očkovacích prípravkov.

Epidemiológia hepatitídy A

Vírus hepatitídy A má vysokú patogenitu pre ľudí. Podľa záverov Svetovej zdravotníckej organizácie (WHO) (1987) je na začiatku choroby stačilo infikovať len jeden virión. Avšak praktická infekčná dávka je pravdepodobne omnoho vyššia. Zdrojom infekcie je iba infikovaná osoba. Vírus sa uvoľňuje vo veľkom množstve s výkalmi 12-14 dní pred objavením žltačky a do 3 týždňov. Ikterické obdobie. Významné rozdiely v izolácii patogénu u pacientov s ikterickou, žltačnou a asymptomatickou formou hepatitídy A neboli zistené. Metóda infekcie je fekálne-orálna, hlavne vodná, a taktiež domácimi a potravinovými cestami. Metóda infekcie je fekálne-orálna, hlavne vodná, a taktiež domácimi a potravinovými cestami. Hlavnou (primárnou) cestou prenosu vírusu je voda. Je tiež možné infikovať vzduchom. Vnímavosť obyvateľstva je univerzálna. Väčšinou sú deti mladšie ako 14 rokov choré. Choroba má výraznú sezónnu sezónu.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Symptómy hepatitídy A

Inkubačná doba sa pohybuje od 15 do 50 dní, čo závisí od množstva infikujúcej dávky vírusu, avšak v priemere je 28-30 dní. Potom, čo v tele, vírusu hepatitídy A replikuje v regionálnych lymfatických uzlín, do krvi a potom sa pečeňové bunky a spôsobuje difúzna akútna hepatitída, ktorá je sprevádzaná poškodenie pečeňových hepatocytov a retikuloendotelových buniek a zníženie jeho detoxikačné a bariérovej funkcie. Poškodenie hepatocytov sa nevyskytuje v dôsledku priameho účinku vírusu, ale v dôsledku imunopatologických mechanizmov. Najtypickejšie obraz hepatitídy A je akútne žltačkou cyklická forma: Inkubačná doba je prodromálne (preicteric), žltačka a rekonvalescencia obdobie. Avšak, v ohniskách infekcie ukazuje veľký počet pacientov s asymptomatickou a anicteric formy infekcie, ktorých počet prevažuje nad Ikterické ( "ľadovom fenomén").

Postinfekčná imunita je silná a dlhotrvajúca, spôsobená vírusovými neutralizujúcimi protilátkami a imunitnými pamäťovými bunkami.

Mikrobiologická diagnostika hepatitídy A

Diagnóza hepatitídy A (s výnimkou kontaminácie zvierat - šimpanzov marmozet, paviánov, ktoré sme) na základe rôznych imunologických metód: DGC imunofluorescenčný metódou, hemaglutinácie imunitný adhézie (komplex vírusového antigénu + protilátky v prítomnosti komplementu adsorbovaného na erytrocytoch a spôsobuje ich priľnavosti) , Avšak použiteľnosť týchto metód je obmedzená kvôli nedostatku špecifických vírusových antigénov a imunofluorescenčné reakcie vyžaduje pečeňovej biopsie, čo je nežiaduce. Spoľahlivá a špecifická metóda je imúnny elektrónová mikroskopia, ale je to veľmi časovo náročné. Z tohto dôvodu, kým jedinou prijateľnou metódou pre imunologické reakcie je ImmunoSorbent assay pevnej fázy vo forme IPM, alebo RIM, a to najmä v modifikácii "zachytenie" imunoglobulínu M. V našej krajine na tento účel navrhnuté testovacieho systému - "DIAG-A-GEO". Pracovný princíp tohto testovacieho systému je nasledujúci. Na stenách polystyrénu lunochek naviazané prvý protilátok na imunoglobulíny triedy M (antiimmunoglobuliny M) sa pridá do skúmaného séra pacienta. Ak je trieda IgM, budú viazať na protilátky-Ti-M, potom sa dá do určitej vírusového antigénu (vírus hepatitídy A), ktorá sa získava pestovaním v bunkovej kultúre. Systém sa prepláchne, a k tomu sa pridá antivírusové protilátky značenej chrenovou peroxidázou. Pokiaľ došlo k interakcii všetkých štyroch komponentov systému, je štvorvrstvový "sendvič":

• antiimunoglobulíny M,
• imunoglobulíny M (proti vírusu hepatitídy A - v testovanom sére pacienta),
• vírusový antigén,
• antivírusové protilátky označené enzýmom.

Na zistenie tohto komplexu sa substrát enzýmu pridáva do lunet. Pod vplyvom enzýmu sa zničí a vytvorí sa farebný produkt. Intenzita farby sa môže kvantitatívne merať spektrofotometrom alebo fotokolimetrom.

Výhodou metódy "zachytenia" IgM je, že protilátky tejto triedy imunoglobulínov sa objavujú pri primárnej imunitnej odozve a indikujú aktívny stupeň infekcie, zmiznú po prenesenej chorobe. Antivírusové protilátky patriace do triedy IgG naopak pretrvávajú dlho po ochorení a poskytujú získanú imunitu. Na detekciu vírusu hepatitídy A sa navrhuje metóda DNA sondy: ako sonda sa použije komplementárna sonda vRNA.

Liečba hepatitídy A

Vzhľadom k tomu, že v vírusovej hepatitídy zníženú produkciu interferónov, hepatitída A liečba založená na použití interferónu induktor a jej endogénnej syntézu amiksin.

Špecifická prevencia hepatitídy A

Predtým široko používané seroprevention hepatitídy A za použitia y-globulín nebolo odôvodnené, však, dôraz bol kladený na držanie imunizáciu vykonáva očkovanie proti hepatitíde A. Na tento účel sa vyvíjajú a používajú rôzne varianty vakcín. V Rusku bola účinná očkovacia látka proti hepatitíde A získaná už v roku 1995 a teraz sa úspešne aplikovala.