Konfokálna intravitálna mikroskopia rohovky

Konfokálna mikroskopia rohovky je jednou z moderných metód vyšetrovania; umožňuje vykonávať intravitálne sledovanie rohovky s vizualizáciou tkanív na bunkovej a mikroštruktúrnej úrovni.

Táto metóda, vzhľadom k pôvodnému návrhu mikroskopu a jeho vysokému rozlíšeniu, umožňuje vizualizáciu živých rohovkových tkanív , meranie hrúbky každej z ich vrstiev a posúdenie stupňa morfologických porúch.

Účel konfokálnej mikroskopie rohovky

Charakterizujte morfologické zmeny v rohovke vyplývajúce z rôznych zápalových a dystrofických ochorení, ako aj z chirurgických zákrokov a účinkov CR.

Morfologické údaje sú potrebné na posúdenie závažnosti patologického procesu, účinnosti liečby a určenia taktiky liečby pacienta.

Indikácie postupu

• Zápalové ochorenia rohovky ( keratitída ).
• Dystrofické ochorenia rohovky ( keratokonus, Fuchsova dystrofia atď.).
• Syndróm "suchého oka".
• Podmienky po chirurgických zákrokoch na rohovke (cez transplantáciu rohovky, keratorefrakčné operácie).
• Podmienky spojené s nosením kontaktných šošoviek.

[1], [2], [3], [4]

Príprava

Táto štúdia je možná bez použitia anestetík. Kvapka ponornej kvapaliny sa umiestni na šošovku objektívu konfokálneho mikroskopu. Tým sa eliminuje priamy kontakt šošovky s rohovkou a minimalizuje sa riziko epiteliálneho poškodenia.

[5], [6], [7], [8], [9],

Technika konfokálna mikroskopia rohovky

Štúdia sa uskutočňuje na konfokálnom mikroskopu ConfoScan 4 (Nider) s nárastom 500 krát. Prístroj vám umožní preskúmať rohovku po celej jej hrúbke.

Veľkosť skúmaného pásma je 440 × 330 μm, hrúbka snímacej vrstvy je 5 μm. Objektív s kvapkou gélu sa do rohovky dotkne a nastaví tak, aby hrúbka ponornej kvapalnej vrstvy bola 2 mm. Návrh zariadenia umožňuje preskúmať rohovku v centrálnej zóne a jej parciálnych oblastiach.

Kontraindikácie postupu

Relatívna kontraindikácia označovala podráždenie oka na pozadí akútneho zápalového procesu.

[10], [11]

Normálny výkon

Normálny morfologický obraz rohovky

Predný epitel pozostáva z 5 až 6 vrstiev buniek. Priemerná hrúbka celého epitelu je približne 50 μm. Podľa morfologickej štruktúry sa rozlišujú nasledujúce vrstvy (zvnútra smerom von): bazálne, subkutánne a povrchné.

• Najvnútornejšia (bazálna) vrstva je reprezentovaná malými hustými cylindrickými bunkami bez viditeľného jadra. Okraje bazálnych buniek sú jasné, jasné.
• Stredná vrstva sa skladá z 2-3 vrstiev krížových buniek v tvare chrbtice s hlbokými invágiami, do ktorých sa budujú výrastky susedných buniek. Mikroskopicky sú hranice buniek pomerne dobre rozlíšiteľné a jadrá nemusia byť definované alebo fuzzy.
• Povrchová vrstva epitelu je reprezentovaná jednou alebo dvoma vrstvami polygonálnych buniek s jasnými hranicami a homogénnou hustotou. Jadrá sú zvyčajne jasnejšie než cytoplazmy, v ktorých je možné tiež rozlíšiť tmavý prsteň s blízkym jadrom.

Medzi bunkami povrchovej vrstvy sa rozlišuje medzi tmavou a svetlou. Zvýšená odrazivosť epiteliálnych buniek indikuje pokles hladiny metabolizmu v nich a začiatok ich deskvamácie.

Bowmanova membrána je transparentná štruktúra, ktorá neodráža svetlo, takže nie je možné ju vizualizovať pri konfokálnej mikroskopii.

Subbasický nervový plex sa nachádza pod membránou Bowman. Zvyčajne nervové vlákna vyzerajú ako jasné pásy bežiace paralelne na tmavom pozadí a navzájom sa dotýkajú. Odrazivosť (odrazivosť) môže byť nerovnomerná v dĺžke vlákna.

Strom rohovky zaujíma 80 až 90% hrúbky rohovky a pozostáva z bunkovej a extracelulárnej zložky. Základnými bunkovými prvkami stromy sú keratocyty; tvorí približne 5% objemu.

Typický mikroskopický vzor stromy zahŕňa niekoľko jasných nepravidelných oválnych telies (keratocytové jadrá), ktoré ležia v hrúbke priehľadnej tmavo šedej alebo čiernej matrice. Za normálnych okolností nie je vizualizácia extracelulárnych štruktúr možná z dôvodu ich transparentnosti. Strom sa môže podmienene rozdeliť na podvrstvy: predné (umiestnené priamo pod membránou Bowman a tvoriace 10% hrúbky stromy), predné, stredné a zadné.

Priemerná hustota keratocytov je vyššia v prednej strome, postupne ich počet klesá smerom k zadným vrstvám. Predné hustota bunka strómy je takmer dvakrát vyššia ako zadné stromálnych buniek (v prípade, že hustota buniek predného strómy je brané ako 100%, potom je hustota zadnej asi 53,7% buniek). V prednej strome jadrá keratocytov majú tvar kruhového tvaru fazule a v zadnom oválnom a predĺženom.

Jadrá keratocytov sa môžu líšiť v jasnosti. Rôzna schopnosť odrážať svetlo závisí od metabolického stavu. Jasnejšie bunky sa považujú za aktivované keratocyty ("stresové bunky"), ktorých aktivity sú zamerané na udržanie vnútornej rohovkovej homeostázy. V norme a zornom poli existujú jednotlivé bunky.

Nervové vlákna v prednej strome rohovky sú vizualizované ako jasné homogénne pásy, ktoré často tvoria bifurkácie.

Desempčná membrána je normálne priehľadná a nie je vizualizovaná konfokálnou mikroskopiou.

Zadný epitel je monovrstva hexagonálnych alebo polygonálnych plochých buniek s rovnomerne ľahkým povrchom na pozadí odlišných tmavých medzibunkových hraníc.

Zariadenie poskytuje možnosť manuálneho alebo automatického výpočtu hustoty buniek, ich oblasti a koeficientu variability.

Patologické zmeny v štruktúre rohovky

Keratokonus je charakterizovaný výraznými zmenami v prednom epiteli a stromovej vrstve rohovky.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]